【摘 要】
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【目的】探讨胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)对主动脉瓣间质细胞(valvular interstitial cells,VICs)表型转化的影响,提示GLP-1在钙化性主动脉瓣疾病(Calcific Aortic Valve Disease,CAVD)所起的保护性作用。【方法】胶原酶消化法分离并培养猪主动脉瓣膜间质细胞,用高钙(2.8mmol/L),
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【目的】探讨胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)对主动脉瓣间质细胞(valvular interstitial cells,VICs)表型转化的影响,提示GLP-1在钙化性主动脉瓣疾病(Calcific Aortic Valve Disease,CAVD)所起的保护性作用。【方法】胶原酶消化法分离并培养猪主动脉瓣膜间质细胞,用高钙(2.8mmol/L),高磷(2.0mmol/L)法刺激建立主动脉瓣间质细胞钙化模型。采用不同浓度的GLP-1分别刺激24h(GLP-1含量分别为0ng/ml、25ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、400ng/ml),通过检测细胞裂解液中钙离子浓度确定最佳浓度。用最佳刺激浓度刺激细胞12h、24h、48h、72h,同样通过检测细胞裂解液中钙离子浓度确定最佳干预时间。我们采取最佳的刺激浓度刺激细胞达到最佳干预时间,提取RNA及蛋白,通过RT-PCR以及Western blot分别测定骨化相关指标骨桥蛋白(OPN),Runt相关转录因子2(Runx-2)的表达情况以及相关信号通路蛋白p65,p38,ERK,JNK的表达情况。【结果】GLP-1作用导致细胞裂解液钙离子浓度降低且最适刺激浓度为200ng/ml,最佳刺激时间为24h。相比于对照组,GLP-1干预组OPN,Runx-2m RNA和蛋白表达都降低。GLP-1通过抑制p65,p38两条信号传导通路从而抑制钙化。【结论】我们的研究显示GLP-1可通过抑制p65,p38活化从而抑制主动脉瓣膜间质细胞的钙化,为临床上抑制主动脉瓣钙化提供了新的理论依据。
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