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利凡诺是国内普遍使用的一种中孕引产药物,实践证明羊膜腔内注射有着较低的并发症发生率,避免了药物的全身吸收和感染。现今在国内,羊膜腔内注射利凡诺作为政府机构或者公共医院广泛合法使用的流产途径。但是,由于中国传统男孩偏好观念的影响,以及独生子女政策,使得近年来,在B超扫描确认女婴后,非法使用利凡诺中止妊娠,以获得再次怀上男孩的机会。这种选择性生育行为导致我国出生性别比严重失衡,报道我国出生人口性别比自20世纪80年代开始偏高且持续升高,1990年第四次人口普查时出生人口性别比为111:100, 2000年第五次人口普查时为117:100,严重偏离了正常范围。这将直接影响经济发展和社会稳定,影响人民群众的生活质量。因此,建立一种灵敏有效的方法对生物样品中的利凡诺进行定性和定量测定,来对利凡诺的非法滥用进行监测显得尤为重要。利凡诺(Ethacridine Lactate,Rivanol,Acrinol),又名雷佛奴尔,乳酸依沙吖啶,其化学名为2-乙氧基-6,9-二氨基吖啶乳酸盐(2-ethoxy-6,9-diaminoacridine lactate hydrate),是一种强力杀菌剂,它能引起离体与在体子宫的收缩,表现为子宫肌肉收缩频率增加,幅度或紧张度增大,将利凡诺注入羊膜腔内,能引起子宫收缩,并能达到排出胎儿和胎盘的引产目的。临床引产效果可达95%以上,是临床上中期妊娠引产常用的方法。国内外文献资料中对利凡诺测定方法的报道较少,生物样品中利凡诺药物浓度的测定文献更少,而且难以套用。所以对羊水样品中的利凡诺药物浓度进行取样测定,并进行完整的测定方法学研究。具体的研究内容包括以下两个部分:1.羊水中利凡诺药物浓度的分光光度法测定采用紫外-可见分光光度法(ultraviolet and visible spectrophotometry,UV-vis)对羊水中利凡诺的药物浓度进行测定。由于空白羊水基质在相应波长也存在吸收,低浓度下难以找到合适的吸收波长对其准确定量。应用荧光分光光度法(spectrofluorometry , SPF)对羊水中利凡诺的药物浓度进行测定。正丁醇一次提取,在WFY-28型荧光分光光度计上220 nm~760 nm范围内分别进行激发扫描和发射扫描。本实验选用利凡诺检测的激发波长为370 nm,发射波长为495 nm。回收率为93.5%, RSD为3.0%。该法简便、快速、灵敏度较好。但是空白羊水在此扫描发射波长下存在一定强度的发射光,当羊水中的利凡诺衰减到一定浓度时,这种方法很难断定羊水是否含有利凡诺。所以这种方法存在一定局限性。2.羊水中利凡诺药物浓度的高效液相色谱法测定应用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography ,HPLC)对羊水中利凡诺的药物浓度进行测定。采用Waters Spherisorb C18色谱柱(4.6 mm×250 mm×5μm),流动相为甲醇-乙腈-0.2 mol/L乙酸铵(ammonium acetate, NH4AC)(60:37:3,v/v/v),流速为1.0 ml/min,荧光检测器的激发和荧光波长分别为360 nm和500 nm,柱温为40℃,采用外标法定量,测定羊水中的利凡诺药物浓度。在本文条件下,利凡诺保留时间(retention time,RT)约7 min。全程采样(谱图纪录)时间为10~15 min。利凡诺的线性范围为0.005~1.00μg/ml, r = 0.9984。利凡诺的检测限为0.0007μg/ml,0.20μg/ml和0.80μg/ml质量浓度的利凡诺羊水标准样的回收率分别为92.1%和98.3%,日内RSD分别为1.5%和1.4%,日间RSD分别为6.5%和2.2%。经方法学验证,该方法完全符合中国药典2005版规定,可作为临床上检测羊水中利凡诺药物浓度的方法。