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[目的]探索并证实传统抗痨方药百合固金汤是否具有通过活化自噬途径从而影响巨噬细胞内结核分枝杆菌(MTB)存活的作用。通过探讨自噬相关基因atg5、atg7、atg8、atg12,自噬相关蛋白LC3的表达情况及药物作用前后结核分枝杆菌CFU及DNA表达的变化,阐明白噬在抗结核感染中所起的作用及百合固金汤通过自噬途径影响胞内结核分枝杆菌存活的可能作用机理。 [方法]按常规方法制备百合固金汤含药血清及空白血清。①设空白对照组、单纯含药血清组、模型组,分别于细胞培养后0h、6h、12h、24h、36h收集细胞,采用RT-QPCR法检测巨噬细胞自噬相关基因atg5、atg7、atg8、atg12mRNA的表达水平。②设空白对照组、模型组、单纯含药血清组、含药血清处理组,分别于细胞培养后12h、24h、36h收集细胞,采用western-blot法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达水平。③设模型组、含药血清处理组,取空白血清及百合固金汤含药血清分别作用于感染结核分枝杆菌的RAW264.7小鼠巨噬细胞,经12h、24h、36h后,分别采用CFU法及QPCR法检测巨噬细胞内结核分枝杆菌的荷菌数。 [结果]①经百合固金汤含药血清作用于巨噬细胞不同时间点后,选定24h为研究含药血清对巨噬细胞内自噬通路影响的最佳作用时间点。与空白对照组相比,单纯含药血清组的自噬相关基因atg5、atg7、atg12的表达明显上调(P<0.05),而模型组无此现象。②巨噬细胞经特定处理12h、24h、36h后,与空白对照组相比,24h、36h单纯含药血清组自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达均增高(P<0.01);与模型组相比,24h、36h含药血清处理组自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达均增高(P<0.01):12h未见明显差异(P>0.05)。③含药血清处理细胞12h、24h、36h后,在36h时与模型组相比,含药血清处理组细胞内结核分枝杆菌的数量明显减少(P<0.05);其余时间点未见明显差异(P>0.05)。 [结论]百合固金汤可能通过激活巨噬细胞自噬现象发挥对巨噬细胞内结核分枝杆菌的杀伤作用。