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蛋白质中含有许多活性成分,通过酶解或其他手段可释放出来。以牛初乳为原料,分离酪蛋白、乳清蛋白及乳铁蛋白等主要成分,分别水解,检测水解物的免疫刺激指数,以刺激指数为指标确定水解条件,并将水解物与乳粉按比例混合,形成配方奶粉。实验过程中,将乳清蛋白、酪蛋白在浓度分别为2%、4%、6%、8%,酶与底物比分别为1:30、1:60、1:90的条件下用胰蛋白酶水解。乳铁蛋白在浓度分别为2%、4%、6%,酶与底物比分别为1:30、1:60、1:90的条件下用胃蛋白酶进行水解。采用MTT法分别以浓度为10μg/ml、100μg/ml、1000μg/ml的乳清蛋白、酪蛋白、乳铁蛋白以及三种蛋白的水解产物对脾淋巴细胞的免疫刺激作用进行检测,结果表明:三种浓度下的水解产物对脾淋巴细胞的免疫刺激指数SI值明显高于三种蛋白本身SI值。酪蛋白对脾淋巴细胞的SI值最高为2.53,酪蛋白水解产物在底物浓度6%,酶与底物比为1:30,1000μg/ml条件下SI值最高,为5.83;乳清蛋白对脾淋巴细胞的SI最高值为:2.05,乳清蛋白水解产物在底物浓度8%,酶与底物比为1:30,1000μg/ml时SI值最高,为4.89;乳铁蛋白对脾淋巴细胞的SI值最高为2.29,乳铁蛋白水解产物在底物浓度6%,酶与底物比为1:30,1000μg/ml时SI值最高,为5.33。以免疫刺激指数作为指标,选择以上三个条件为最优水解条件。
将得到的最优水解条件的产物与乳粉按以下比例混合做成乳品配方,在10mg/ml,100mg/ml浓度下进行免疫检测:
(1)奶粉与乳铁蛋白水解产物,酪蛋白水解产物,乳清蛋白水解产物分别按100g:1g混合,均在100mg/ml浓度下SI最高,分别为5.20,5.70,4.77;
(2)依牛奶中三种蛋白比例成分添加水解产物,即酪蛋白水解产物:乳清蛋白水解产物:乳铁蛋白水解产物为80%:19.5%:0.5%,添加蛋白水解产物的总量为6g,在100mg/ml浓度下SI最高,为3.90;
(3)将婴幼儿和中老年奶粉中分别添加6g酪蛋白水解产物,均在100mg/ml浓度下SI最高,分别为4.30和4.50;
(4)婴幼儿奶粉和中老年奶粉,均在100mg/ml浓度下SI最高,为2.40和2.64;
(5)婴幼儿和中老年奶粉中分别掺入辅料,均在100mg/ml时SI最高,分别为2.39和2.47
(6)将(2)与(5)混合,进行免疫检测,婴幼儿配方和中老年配方均在100mg/ml时SI最高,分别为6.10和5.49;
(7)固定乳铁蛋白水解物的量为0.5g,乳清蛋白水解产物和酪蛋白水解产物的总量为6g。调整酪蛋白水解产物与乳清蛋白水解产物的比为3:1;3:2;1:1,均在100mg/ml浓度下SI最高,分别为4.60,5.42和5.40。