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目的:利用DBA/2小鼠移植舌癌荷瘤模型,探讨OK-432肿瘤疫苗对DBA/2荷瘤小鼠脾脏淋巴细胞中的Th1细胞因子以及对TNF-α分泌的影响。解明OK-432肿瘤疫苗的抗肿瘤免疫赋活作用及其调控机制,进一步证实其在机体使用中的安全性和有效性。为体表粘膜肿瘤——口腔癌免疫辅助治疗的临床应用和开发提供科学依据。方法:选择健康的六周龄DBA/2雌鼠作为受体进行舌癌模型的建立。首先,培养KLN-205肿瘤细胞:将KLN-205肿瘤细胞在37℃,5%CO2恒温箱传代培养,每次使用的培养液按照45ml的RPMI-1640培养液加入5ml胎牛血清,0.5ml的双抗的比例配制。精制OK-432瘤苗:以glutaraldehyde(GA)为架桥剂,使得KLN-205细胞可以与OK-432产生交联,构建OK-432肿瘤疫苗。利用相位差荧光显微镜与电子显微镜确认OK-432与KLN-205细胞交联形态,以判断疫苗是否制作成功。将四十八只健康的六周龄DBA/2雌性小鼠随机的分为OK-432组,PBS对照组,OK-432肿瘤疫苗组,每组16只。分别于小鼠右侧腹腔注射以下试剂:OK-432组注射0.7KE/100μl;PBS对照组注射PBS液100μl;OK-432肿瘤疫苗组注射OK-432疫苗5×105/100μl,每周一次,连续注射三周。注射试剂结束后于第一天,第三天,第五天,第七天按组别取出脾脏,制取出脾脏淋巴细胞。用RPMI-1640培养液重悬细胞,计数板计数,调节细胞浓度为5×106/ml,台盼兰染色检测脾细胞存活率大于95%;接种至培养板中,CO2恒温培养箱中培育72小时。用计数板计数培育72小时的脾脏细胞,调整其浓度为2×106/2ml。同时加入培养四代以上的KLN-205肿瘤细胞作为靶细胞。效靶比例为50:1、100:1。在CO2恒温箱中共同培育24小时。将培育好的细胞混合液制取出上清液。ELISA定量检测脾脏淋巴细胞所产生的IFN-γ,IL-2,TNF-α等细胞因子的分泌水平。结果:在肿瘤细胞的刺激下,体外培养72小时后的脾淋巴细胞OK-432组及OK-432疫苗组均可以诱导产生出细胞因子IFN-γ,IL-2,TNF-α。OK-432肿瘤疫苗组中IFN-γ、IL-2以及TNF-α的含量明显高于实验对照组(P<0.05)。在疫苗组中IFN-γ与TNF-α的含量要高于IL-2在培养液中的浓度,其中TNF-α的浓度最高。IFN-γ在三组中总体呈上升趋势,且在不同的实验组中含量明显不同,OK-432组中明显增高,要显著高于对照组。在不同时期脾淋巴细胞培养液中,细胞因子IL-2以及INF-γ的浓度也是有所变化的,尤其以IL-2为例,第一天略高,第七天呈下降趋势。另外TNF-α的变化较为有特点,在第一天后显著提升,在第三天到第五天阶段较为平稳,在第七天时出现回落。当我们将靶细胞浓度提升一倍时,效应细胞的免疫作用也相应的提高,经检测后发现细胞因子的浓度也相应提升。以上所得数据P<0.05均具有统计学意义。结论:OK-432肿瘤疫苗可刺激DBA/2小鼠脾脏细胞Th1细胞及TNF-α的分泌,OK-432肿瘤疫苗可诱导宿主Th1细胞主导的细胞免疫活化,诱发有效的CTL应答,激发和增强宿主对肿瘤的特异性免疫功能。