目的：利用DBA/2小鼠移植舌癌荷瘤模型，探讨OK-432肿瘤疫苗对DBA/2荷瘤小鼠脾脏淋巴细胞中的Th1细胞因子以及对TNF-α分泌的影响。解明OK-432肿瘤疫苗的抗肿瘤免疫赋活作用及其调控机制，进一步证实其在机体使用中的安全性和有效性。为体表粘膜肿瘤——口腔癌免疫辅助治疗的临床应用和开发提供科学依据。方法：选择健康的六周龄DBA/2雌鼠作为受体进行舌癌模型的建立。首先，培养KLN-205肿瘤细胞：将KLN-205肿瘤细胞在37℃，5%CO₂恒温箱传代培养，每次使用的培养液按照45ml的RPMI-1640培养液加入5ml胎牛血清，0.5ml的双抗的比例配制。精制OK-432瘤苗：以glutaraldehyde（GA）为架桥剂，使得KLN-205细胞可以与OK-432产生交联，构建OK-432肿瘤疫苗。利用相位差荧光显微镜与电子显微镜确认OK-432与KLN-205细胞交联形态，以判断疫苗是否制作成功。将四十八只健康的六周龄DBA/2雌性小鼠随机的分为OK-432组，PBS对照组，OK-432肿瘤疫苗组，每组16只。分别于小鼠右侧腹腔注射以下试剂：OK-432组注射0.7KE/100μl；PBS对照组注射PBS液100μl；OK-432肿瘤疫苗组注射OK-432疫苗5×105/100μl，每周一次，连续注射三周。注射试剂结束后于第一天，第三天，第五天，第七天按组别取出脾脏，制取出脾脏淋巴细胞。用RPMI-1640培养液重悬细胞，计数板计数，调节细胞浓度为5×10⁶/ml,台盼兰染色检测脾细胞存活率大于95%；接种至培养板中，CO₂恒温培养箱中培育72小时。用计数板计数培育72小时的脾脏细胞，调整其浓度为2×10⁶/2ml。同时加入培养四代以上的KLN-205肿瘤细胞作为靶细胞。效靶比例为50：1、100：1。在CO₂恒温箱中共同培育24小时。将培育好的细胞混合液制取出上清液。ELISA定量检测脾脏淋巴细胞所产生的IFN-γ，IL-2，TNF-α等细胞因子的分泌水平。结果：在肿瘤细胞的刺激下，体外培养72小时后的脾淋巴细胞OK-432组及OK-432疫苗组均可以诱导产生出细胞因子IFN-γ，IL-2，TNF-α。OK-432肿瘤疫苗组中IFN-γ、IL-2以及TNF-α的含量明显高于实验对照组（P<0.05）。在疫苗组中IFN-γ与TNF-α的含量要高于IL-2在培养液中的浓度，其中TNF-α的浓度最高。IFN-γ在三组中总体呈上升趋势，且在不同的实验组中含量明显不同，OK-432组中明显增高，要显著高于对照组。在不同时期脾淋巴细胞培养液中，细胞因子IL-2以及INF-γ的浓度也是有所变化的，尤其以IL-2为例，第一天略高，第七天呈下降趋势。另外TNF-α的变化较为有特点，在第一天后显著提升，在第三天到第五天阶段较为平稳，在第七天时出现回落。当我们将靶细胞浓度提升一倍时，效应细胞的免疫作用也相应的提高，经检测后发现细胞因子的浓度也相应提升。以上所得数据P<0.05均具有统计学意义。结论：OK-432肿瘤疫苗可刺激DBA/2小鼠脾脏细胞Th1细胞及TNF-α的分泌，OK-432肿瘤疫苗可诱导宿主Th1细胞主导的细胞免疫活化，诱发有效的CTL应答，激发和增强宿主对肿瘤的特异性免疫功能。