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本论文以斗嫁蜮为研究对象,通过解剖成熟性腺在体外环境因子的催熟或刺激下促使卵子成熟以及精子的激活,人工授精进行早期胚胎发育研究,为帽贝科动物性细胞催熟和激活提供理论依据;利用石蜡切片技术对消化器官进行组织学研究,为帽贝科动物人工增养殖提供基础资料。 1.斗嫁()精子、卵子激活条件的研究: (1)选取性腺饱满的雄贝作为材料。选择氨水作为调节激活剂,筛选出能激活精子的最佳pH,即精子的激烈运动时间和激活率都最好。筛选出最佳pH后,在这个基础上,进一步研究精子在不同盐度条件下的最佳激活值。最后研究温度对精子激活的影响。结果显示:在水温18℃、盐度32、pH≤8.5时,斗嫁蜮精子的激活率与活力均较低,pH在9~10.5之间时激活率与活力较高,pH=10时的激活率最高(p<0.05);在水温22℃、盐度32时,斗嫁蜮精子在pH=8~10.5时均能被激活,且pH=10时激活率最高(p<0.05),激活率与活力均比18℃时高。在水温18℃、pH=10时,精子在盐度12.8~40均能被激活,盐度32~34激活率和活力最高(p<0.05);且水温22℃的激活率与活力均比18℃时高。在pH为9.5或10的氨海水中精子在10~45℃中都能被激活,在20~25℃时激活率较高,同样的温度下,精子在pH10氨海水比pH9.5氨海水中激活率高5.2%。 (2)选取性腺饱满的雌贝进行解剖。选择氨水作为催熟剂,将解剖卵浸泡于氨海水中,取样观察并记录卵子成熟情况,将已成熟卵子和活力强的精子混合进行授精,检验体外催熟精卵受精率以及发育到担轮幼虫率。实验发现,解剖卵在海水和氨海水中都可以达到成熟,并且可以受精,自然海水中的催熟率比氨海水中低,在水温17℃中,卵子在氨海水中浸泡10 min出现胶质膜不完整个体,28 min出现无胶质膜个体,经过61 min浸泡后无胶质膜个体达到86.4%;卵子在自然海水中浸泡破裂的时间比氨海水中长,27 min才出现胶质膜不完整个体,64 min后无胶质膜个体只有61.9%。解剖授精受精率最高在卵子促熟后继续浸泡在海水中30 min内,最适范围卵子浸泡后25.30 min,担轮幼虫率加氨水组为47.7%,海水组仅为18.3%,氨海水对卵子的促熟效果显著。 2.斗嫁()早期胚胎发育研究:在第二章实验结果的基础上进行人工授精、以及人工催产的研究。结果表明:斗嫁()可以通过人工催产进行排放精卵也可以进行人工解剖授精,其中以人工催产法最好,受精率高,畸形率低,通过解剖授精和人工催产两种方法对比,受精卵均可以发育到匍匐期。 3.斗嫁蜮消化器官组织学研究:本实验利用石蜡切片技术及电子显微镜,研究了斗嫁蜮消化器官组织结构。斗嫁()消化器官由消化道和消化腺两部分组成,口区、食道、嗉囊、胃、肠和肛门组成消化道;消化腺主要为肝胰腺。口腔中有一对颚片,一个对称的齿舌软骨,一条长齿舌,包裹在齿舌囊中,通过肌肉束和齿舌软骨相连;食道壁由单层柱状上皮细胞构成,食道中段上皮细胞有单细胞腺体存在;嗉囊黏膜上皮由单层柱状上皮细胞构成,黏膜下层很薄,基层主要由环肌构成;胃黏膜上皮由单层柱状上皮细胞构成,黏膜下层很薄,由单层肌纤维组成。肠道肠黏膜上皮为单层柱状,黏膜下层不发达。肝胰腺呈管泡状由腺细胞和嗜碱性细胞组成。