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研究背景与目的： 肝细胞癌（以下简称肝癌）是我国常见的恶性肿瘤之一，全球每年约一半以上的肝癌新发病例和死亡病例都发生在中国。肝癌起病隐匿，进展迅速，多数患者就诊时已为中晚期，预后极差。导致肝癌患者预后差的主要原因是因为肿瘤侵袭性强，早期易侵犯脉管系统，即使接受根治性手术切除，患者术后仍易出现复发转移。因此，寻找与肝癌侵袭转移相关的分子标志物，并探讨其分子机制，为肝癌治疗寻找潜在的分子靶点具有重要的临床意义。 Musashi（MSI）基因家族最初在果蝇感受器细胞不对称分化过程的研究中发现，包括两个在基因序列上高度同源的基因亚型，Musashi1（MSI1）和Musashi2（MSI2）。MSI家族蛋白为RNA结合蛋白，可通过结合mRNA发挥转录后调节的作用。文献报道 MSI家族在许多组织的干细胞及前驱细胞中相对高表达，可促进神经前驱细胞的增殖、影响造血干细胞的分化等；此外，研究发现 MSI在肿瘤的发生发展中发挥着重要作用，与肿瘤的复发转移及预后不良密切相关。MSI在肝癌中的表达情况及其作用机制尚未见报道。本研究通过对肝癌组织、匹配癌旁肝组织和正常无肝硬化肝组织中MSI家族蛋白的检测，以及预后生存分析，并探索其相关分子调控机制，旨在明确肝癌组织中MSI基因家族的表达情况、及其影响肝癌侵袭转移的调控途径，探讨 MSI家族蛋白在肝癌临床预后中的预测价值。 材料与方法： 1.免疫组织化学（Immunohistochemistry;IHC）方法检测149例肝癌组织、匹配癌旁肝组织和40例无肝硬化正常肝组织中MSI基因家族蛋白（MSI1和MSI2）的表达情况； 2.统计分析确定MSI家族与患者复发、生存期及临床病理参数的相关性；MSI1和MSI2在肝癌组织、癌旁组织及正常肝组织中的表达差异采用单因素方差分析；通过Kaplan-Meier生存分析、log-rank检验及单因素、多因素COX回归模型，分别分析MSI1和MSI2与肝癌患者预后的关系；通过χ2检验或Fisher确切概率法分析MSI1和MSI2蛋白表达与患者临床病理参数间的关系； 3.采用核浆分离实验联合Western blot检测MSI1和MSI2蛋白在肝癌细胞中的亚定位情况； 4.选择两株侵袭转移能力相对较高和较低的肝癌细胞系 MHCC97H和SMCC7721，分别通过siRNA干扰其MSI2基因表达；Western blot检测MSI2表达降低后，伴随EMT标志物的变化情况，以及Transwell侵袭小室检测干扰MSI2后肝癌细胞侵袭能力的改变； 5. Western blot检测3株肝癌细胞株中MSI2蛋白与EMT（Epithelial-mesenchymal transitions;EMT）标志物E-cadherin和Vimentin的表达，并分析是否存在一定的相关性； 6.免疫荧光（Immunofluoresence staining;IF）检测MSI2、E-cadherin、Vimentin在肝癌细胞中的定位，及下调MSI2表达后E-cadherin和Vimentin的表达变化情况； 7.免疫组化进一步检测肝癌组织中E-cadherin、Vimentin的表达，并通过χ2及Pearson进行E-cadherin、Vimentin与MSI2的相关性分析。 实验结果： 1. MSI1和MSI2在肝癌组织中的表达明显高于匹配癌旁组织及无肝硬化正常肝组织：37.6％（56/149）的肝癌组织中MSI1高表达，其匹配的癌旁组织仅5.3%（8/149）高表达；MSI2高表达存在于49.0%（73/149）的肝癌组织中，匹配癌旁组织中MSI2的高表达仅占8.1%（12/149）；与此同时在正常无肝硬化肝组织中未观察到MSI1和MSI2的高表达； 2. MSI1和MSI2表达与肝癌患者临床病理参数的相关性分析：MSI1高表达与肿瘤直径>5 cm及BCLC分期B期相关（P<0.05）；而MSI2的高表达与肿瘤大小（直径>5 cm）、肿瘤个数（多个）、伴脉管侵犯、BCLC分期（C期）、早期复发相关（P<0.05），并且与脉管侵犯及早期复发关系密切（P<0.001）； 3. Kaplan-Meier生存分析表明肿瘤组织中MSI1表达高低与患者预后无明显相关性（P>0.05），而肝癌MSI2高表达提示患者预后不佳。肿瘤组织中MSI2高表达的肝癌患者，其3年、5年复发率明显高于MSI2低表达的肝癌患者（88.6%和90.0%vs.54.2%和55.9%；P<0.001）； MSI2高表达的肝癌患者的3年、5年总体生存率亦明显低于MSI2低表达的肝癌患者，分别为26.3%和20.4%vs.67.7%和55.1%，差异均有统计学意义（P<0.001）； 4.肝癌细胞系中干扰MSI2表达，可显著降低肝癌细胞的侵袭能力； 5. Western blot及免疫荧光结果表明：肝癌细胞中干扰MSI2基因表达，可下调EMT上皮标志物E-cadherin和ZO-1，伴随间质标志物Vimentin、N-cadherin和α-SMA表达增高； 6.免疫组化结果显示：肝癌组织中MSI2表达水平与E-cadherin的表达呈负相关，而与Vimentin呈正相关。 结论： 1.肝癌组织中MSI基因家族蛋白（MSI1和MSI2）表达高于匹配的癌旁无瘤肝组织、以及无肝硬化正常肝组织；且两者细胞亚定位存在差异，MSI1主要定位于细胞浆，而MSI2主要定位在细胞核； 2. MSI1和MSI2对肝癌患者预后的临床预测价值迥异：MSI1与肝癌复发转移无明显相关性，而MSI2是肝癌患者预后不良的独立影响因素； 3.肝癌中MSI2可通过诱导EMT，从而促进肿瘤的侵袭与转移。