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背景:非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是流行最广的肺癌,占肺癌病例的80%至85%,其发病率及死亡率高、术后易复发且预后差。目前,NSCLC患者诊断后的五年存活率不足15%,虽然近年来新的治疗手段不断发展,但对NSCLC的治疗效果依然没有显著的改善。肿瘤细胞的侵袭和转移是治疗肺癌过程中最需要解决的的难题和关键。因此,寻找一种新的治疗方法能够抑制肿瘤细胞转移和侵袭就显得至关重要。最新研究发现,一种P27kip1相关蛋白P27RF-Rho在肿瘤发生及发展过程当中发挥了非常重要的作用。P27RF-Rho主要通过调节Rho(ras homologus oncogenes)通路,活化Rho蛋白来发挥作用,从而促进肿瘤的形成。但P27RF-Rho做为一个癌基因,其在肺癌的发生发展进程中所起的作用及相应的分子机制还缺少深入的研究。RNA干扰(RNA interference,RNAi)作为一种靶向沉默目的基因的高特异性手段,因其操作方便,成本低廉,效果显著,已经在抗肿瘤、抗病毒以及细胞信号转导通路研究等方面得到了广泛的应用。其中慢病毒介导的RNAi是最常用的手段。目的:本实验在非小细胞肺癌A549细胞系中靶向沉默P27RF-Rho基因,观察其对A549细胞增殖、细胞周期、凋亡、迁移及侵袭能力的影响,探究其作为肺癌靶向治疗新的潜在位点的可行性。方法:1.构建P27RF-Rho RNAi慢病毒,并感染A549细胞。实验分为P27RF-Rho-si RNA实验组、Scramble-si RNA阴性对照组和A549空白对照组。采用Western blot检测对三组细胞中P27RF-Rho蛋白的表达情况进行测定。2.细胞生长增殖实验:采用MTT比色法检测三组细胞增殖能力的变化。3.细胞周期分析:采用q RT-PCR检测三组细胞周期相关蛋白P16、CDK-5的m RNA水平,Western blot检测P27kip1、Cycline蛋白的表达水平。4.细胞凋亡实验:Western blot法检测三组细胞凋亡相关蛋白P53、Bax、以及抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平的变化。5.细胞迁移实验:采用细胞划痕愈合实验对三组细胞的迁移能力进行检测。6.细胞侵袭能力实验:利用Transwell实验评价三组细胞的侵袭能力的变化。结果:1.成功构建含P27RF-Rho干扰序列的慢病毒载体,并成功筛选出了P27RF-Rho表达下调的稳定细胞株,经Western blot检测干扰组P27RF-Rho的蛋白表达水平较对照组明显下降。2.P27RF-Rho基因沉默后,干扰组细胞的增殖能力明显降低,与阴性对照组及空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。3.q RT-PCR检测结果显示,干扰组细胞中P16 m RNA表达水平明显升高,而CDK-5的m RNA表达水平则出现了降低;Western blot检测结果显示,相较于阴性对照组以及空白对照组,干扰组中P27kip1表达水平明显升高、而Cycline蛋白的表达水平明显下降。4.Western blot检测细胞凋亡相关蛋白,干扰组细胞的P53、Bax蛋白水平较阴性对照组和空白对照组的水平明显升高,而抗凋亡蛋白Bcl-2的水平则出现下降。5.干扰组细胞迁移能力明显低于空白对照组和阴性对照组。6.干扰组细胞的穿膜能力明显低于空白对照组及阴性对照组。结论:1.沉默P27RF-Rho基因可抑制非小细胞肺癌细胞A549的增殖能力。2.沉默P27RF-Rho基因可促进非小细胞肺癌细胞A549的凋亡。3.沉默P27RF-Rho基因可抑制非小细胞肺癌细胞A549的迁移及侵袭能力。