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第一部分 血清中miRNA作为结直肠癌早期诊断标志物的筛选及验证研究[目的]检测结直肠癌患者血清中miRNA的表达情况,筛选出可用于其早期诊断的miRNAs并评估其诊断效能。[方法]该部分实验分三步进行,采用qRT-PCR的方法,初筛阶段,首先对40例患者血清(其中健康对照、结直肠腺瘤组各10例,结直肠癌组20例)进行528条miRNA表达谱筛查,复筛阶段,用210例血清样本(健康对照和结直肠腺瘤各60例、结直肠癌组90例)对初筛得到的候选miRNA进行复筛,验证阶段,收集325例患者血清样本(120例健康对照、98例结直肠腺瘤、107例结直肠癌)验证筛查阶段最具有差异性表达的miRNAs,同时行二元logistic回归分析,单独或联合多条miRNAs的表达水平绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线),计算曲线下面积(AUC),分析miRNA诊断结直肠癌的价值。[结果]5条miRNAs组合(miRNA-1246,miRNA-202-3p,miRNA-21-3p,miRNA-532-3p,和miRNA-1229-3p)能有效区分结直肠癌和健康对照组,ROC曲线下面积为0.960,(95%置信区间[CI]:0.937-0.983),敏感性91.6%,特异性91.7%,另外,该组合同样能准确的判断结直肠癌与结直肠腺瘤,ROC曲线下面积为0.951,(95%置信区间[CI]:0.922-0.980),敏感性为 94.4%,特异性为 84.7%。[结论]该血清5条miRNAs联合诊断组合可以准确地区分结直肠癌与结直肠腺瘤和健康人群,具有较高的灵敏性和特异性,其有望作为一种既便宜又具有非侵入特征的用于结直肠癌的早期诊断检测方法。第二部分 组织中miRNA作为Ⅱ期和Ⅲ期结直肠癌预后标志物的筛选及验证研究[目的]筛选出结直肠癌组织中差异性表达的miRNA,评估其对结直肠癌预后判断的价值。[方法]采集200例结直肠癌患者福尔马林固定石蜡包埋的组织标本,根据随访结果,分为预后良好组和预后不良组,初筛阶段,对20例患者肿瘤组织(预后良好和不良组各10例)进行462条miRNA表达谱的筛查,复筛阶段,扩大样本量(预后良好和不良组各30例)对初筛阶段差异性表达的miRNA进行复筛,验证阶段,收集预后良好和不良组织标本各60例,对复筛得到的差异性表达miRNA进行验证,同时行二元logistic回归分析,单独或联合多条miRNAs的表达水平绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线),计算曲线下面积(AUC),分析miRNA判断结直肠癌预后良好或预后不良的诊断价值。[结果]4 条 miRNAs(miRNA-221-5p,miRNA-339-5p,miRNA-18a-3p 和 miRNA-92a-3p)联合能有效判断结直肠癌预后,ROC曲线下面积可达0.793(95%置信区间[CI]:0.706-0.880),敏感性 76.7%,特异性 85.0%。[结论]我们通过实验发现结直肠癌组织中差异性表达的4条miRNAs,其联合起来能够有效判断结直肠癌的预后情况,具有较高的灵敏性和特异性。第三部分mSEPT9用于评价结直肠癌的手术治疗效果及预后方面的研究[目的]研究mSEPT9在评估结直肠癌患者手术治疗效果及预后方面的价值。[方法]获取120例结直肠癌患者术前、术后1天和术后7天的血液样本,检测mSEPT9和癌胚抗原的表达水平。[结果]与术前相比,血浆mSEPT9的表达水平于术后1天和术后7天分别下降了 57.6倍和131.1倍,相比之下,癌胚抗原的水平则分别下降了 2.51倍和2.70倍,86.7%的患者可通过mSEPT9评估治疗效果,而仅有44.2%的患者可通过CEA评估,术前mSEPT检测阳性者,术后具有较高的死亡风险。[结论]mSEPT9能够有效评估结直肠癌患者手术疗效及预测预后。