保加利亚乳杆菌亚油酸异构酶合成共轭亚油酸研究

来源 :合肥工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhanggexian
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
共轭亚油酸(Conjugatede linoleic acid, CLA)是具有共轭双键的18个碳原子的不饱和脂肪酸。CLA具有一系列的位置和几何异构体,其中c9,t11-CLA和t10,c12-CLA两种异构体被认为最具有生物活性,研究发现这两种异构体具有抗肿瘤、抗粥样动脉硬化、减肥、免疫调节、抗糖尿病等功能。共轭亚油酸天然存在较少,主要靠人工合成,生物法合成共轭亚油酸具有反应条件温和,异构体成分单一的优点,可用于食品和药品的添加,而亚油酸异构酶做为合成中的重要酶近年来成为研究的热点。本文以保加利亚乳杆菌亚油酸异构酶为研究对象,首先在产物分析鉴定的基础上,对保加利亚乳杆菌诱导产酶条件进行了研究,其次研究酶的分离纯化条件和酶学性质,并对酶的反应体系进行了初步研究。气质联用色谱和液相色谱检测结果表明:保加利亚乳杆菌亚油酸异构酶可以合成CLA,其中含有两种异构体,主要产物为c9,t11-CLA.诱导产酶条件研究表明,在脱脂乳培养基中添加1.5‰(v/v)LA所产酶的共轭亚油酸转化率最高;温度为36℃,培养36h为较适的培养条件;单独添加0.1%(m/v)的乳糖或0.1%(m/v)的氯化钠有利于诱导产酶;在培养基中直接添加LA的效果优于培养3至12h后再进行添加。亚油酸异构酶的最佳提取条件为,以0.7%(m/v)的量添加溶菌酶(30℃,1h),然后在冰水浴中超声破碎(超声3S,间歇4S,90次,功率400W)。粗酶液经过40~80%饱和度的硫酸铵进行盐析,millipore超滤管进行超滤,SephadexG-100凝胶过滤层析的步骤进行分离纯化后,酶的纯化倍数达到5.17倍,比活力为244.78[U/mg]。纯化后的亚油酸异构酶在SDS-PAGE电泳中只有一条条带,达到电泳纯度,分子量为42.69KDa。亚油酸异构酶的酶学特性表明:保加利亚乳杆菌亚油酸异构酶的最适反应温度为40℃,在20-40℃范围内酶有较高的稳定性;最适反应pH值为4.0,pH值在3.0~6.0范围内有较高的稳定性;低浓度(0.01mol/L)的金属离子Ca2+,Zn2+, Mg2+可利于亚油酸异构酶的催化反应,其影响顺序分别为Ca2+>Zn2+>Mg2+;高浓度(0.02mol/L)的SDS有利于亚油酸异构酶的纯化反应;以亚油酸为底物的酶促反应动力学方程得到,Km=3.87mmol/L, Vmax=4.35mmol/mL·h。亚油酸异构酶反应体系初步研究表明:保加利亚乳杆菌亚油酸异构酶在缓冲液体系下CLA转化率最高;正己烷适合为亚油酸异构酶非水体系反应的介质;微水体系在正己烷中添加0.6%的缓冲液的反应体系亚油酸异构酶的CLA转化率较高;在两相体系中正己烷与缓冲液的配比为6:4时,亚油酸异构酶的CLA转化率较高;乙醇不适合做为均相体系的介质。
其他文献
分析了我国企业商标管理现状 ,提出了加强商标管理 ,保护企业权益的几条措施 :建立商标管理制度 ;慎重对待商标的设计与命名 ;及时申请、正确使用注册商标。以提升商标价值 ,
本文共分四章,第一章通过对幽默与讽刺、滑稽的同异辨析,对幽默的内涵做出基本界定,总结出喜剧性、悲剧性和崇高性是幽默必须同时具备的,三者所占比重又决定了幽默的高下层次
综述了多囊卵巢综合征高雄激素血症病机与肝、脾、肾三脏密切相关,有辨证论治、专方专药、周期序贯治疗、外治法和中成药治疗等方法。参考文献21篇。
大坝安全监测是评价大坝安全状态,保障大坝安全运行的重要手段;大坝安全监测的数据采集模块为大坝的运行状态分析提供观测资料,是资料分析的基础。数据分析是根据观测资料,判
大用户直购电,是我国进行电力体制改革的重点和难点之一。勿庸置疑,推行大用户直购电可以促进供需直接见面,进一步挖掘电力市场潜力,提高市场效率,是促进电力体制改革的有益
目的观察不同剂量注射用泮托拉唑钠在中国健康志愿者体内的药代动力学和药效学特征,并评价其安全性。方法用单中心、随机、开放、平行对照的试验设计,筛选20名健康受试者,采
电热涂料是将电能直接转化为热能的功能性涂料,电热涂料的研制是当前特种功能涂料领域研究的一个热点。但目前传统的有机型电热涂料表面发热温度不高,耐热性能较差和易老化脱
目的:观察TGF-β1、β-Smad2/3、t-PA、u-PA、PAI-1、ColⅣ在C-BSA诱导的大鼠膜性肾病(MN)肾组织中的表达以及阿魏酸钠(SF)对它们表达的影响;探讨MN时TGF-β1/Smads信号转导通
半夏泻心汤加减治疗肠易激综合征52例江苏省无锡市北塘区医院(214043)陈新开关键词肠易激综合征;半夏泻心汤;疗效观察肠易激综合征是较常见的疾病,发病机理尚不清楚。笔者从1989~1992年底用半夏泻心
目的:观察心衰合剂治疗慢性心衰的临床疗效,并对其作用机理进行初步探讨。方法:1.将门诊和住院60例充血性心力衰竭患者随机分为2组:每组各30例;对照组单纯使用西药;治疗组在西药基