为了制备安全且有效的气肿疽新型疫苗,控制气肿疽的暴发,本研究建立了气肿疽的原核表达载体,制备了气肿疽融合基因亚单位疫苗和单基因亚单位疫苗,并对两种疫苗的免疫水平进行了评价。本研究根据已报道的气肿疽梭菌的fliA和nanA基因设计两对特异性引物,以气肿疽梭菌基因组DNA为模板,扩增出两段大小分别为429bp的fliA基因片段和1113bp的nanA片段。利用SOE-PCR串联两个片段,在引物中加入了柔性Linker,得到大小约为1587bp的融合基因,并将该融合基因和鞭毛基因分别与pMD18-T Simple载体连接,转化至大肠杆菌感受态DH5α中,获得克隆载体fliA和pMD18-fliA-nanA。继而对克隆载体进行双酶切,获得带有黏性末端的fliA片段和fliA-nanA片段,与具有相同黏性末端的PEGX-4T-1原核表达载体进行连接,将连接后的质粒转化至大肠杆菌感受态BL21中,从而构建出了重组质粒pEGX-4T-fliA-nanA和pEGX-4T-fliA原核表达载体。对重组质粒PEGX-4T-fliA-nanA和pEGX-4T-fliA进行双酶切鉴定、PCR鉴定、及序列测定后,将三项鉴定均为阳性的克隆使用IPTG进行诱导表达。经SDS-PAGE电泳可见大小约83kDa大小的片段,和42kDa大小的片段,进行western-blotting可见目的条带有反应原性。将蛋白进行纯化后对小鼠进行免疫。使用间接ELISA对小鼠的体液免疫进行测定。使用细胞因子IL-2、IL-4和IFN-γ的ELISA检测试剂盒对小鼠的细胞免疫水平进行测定。研究结果表明,FliA(C)蛋白与FliA(C)-NanA融合蛋白均能使小鼠产生体液免疫应答,在相同免疫剂量下,融合蛋白组的体液免疫水平明显高于鞭毛蛋白组,该结果表明,神经氨酸酶对鞭毛蛋白的免疫原性有增强的作用。融合蛋白比鞭毛蛋白可以更快诱导机体产生IL-2、IFN-γ。IL-4检测结果表明,融合蛋白与鞭毛蛋白在该反应中相差不大,只是融合蛋白加快了IL-4的产生速度。本研究成功制备了气肿疽NanA-FliA(C)亚单位疫苗。