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研究目的:本课题通过脂多糖(LPS)干预人内皮祖细胞(EPCs),建立细胞水平脓毒症模型,观察细菌脂多糖(LPS)对人EPCs增殖、黏附功能的影响及不同浓度血必净注射液对其干预作用。以期在细胞水平上检测血必净注射液注射液对脓毒症的作用。
方法:1、从南京大学医学院附属鼓楼医院实验室购得由脐静脉血提取的EPCs株系,经复苏、传代、培养、鉴定。2、将等量EPCs接种到96孔培养板上,随机分为4组:空白对照组、LPS(100ng/ml)对照组、XBJ-1组(LPS孵育EPCs后不同浓度(5mg/ml、25mg/ml、50mg/ml)血必净注射液干预)、XBJ-2组(LPS联合不同浓度(5mg/ml、25mg/ml、50mg/ml)血必净注射液同时孵育EPCs)。3、光学相差显微镜观察并用MTT比色法检测4组EPCs黏附情况、增殖情况。4、用统计学软件处理数据,得出结论。
结果:EPCs生长良好,成短梭状,相互交联,经鉴定系实验所需EPCs。EPCs与LPS共孵育后其增殖能力显著降低(P=0.000),加入血必净注射液后其增殖OD值均有提高(P均<0.05),且呈剂量依赖关系。与对照组比较,EPCs黏附OD值在LPS作用后明显降低(P=0.042),与血必净注射液作用后,EPCs黏附能力较LPS组有改善,但朱见明显剂量-效应关系。
结论:本研究显示单纯LPS可导致EPCs增殖、黏附能力下降,血必净注射液可使受损的EPCs的增殖、黏附能力改善,其中增殖能力随血必净注射液剂量增加而增强,而黏附能力与血必净注射液剂量间未见明显关系,这提示我们血必净注射液可不同程度修复LPS对EPCs的损伤,在G-杆菌所致脓毒症早期使用血必净注射液可能有更好的效果。