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目的:痛风是由尿酸盐结晶沉积于关节组织内及其周围引起的一种慢性炎性风湿病。临床上以高尿酸血症(hyperuricemia)、关节炎反复发作、痛风石(tophi)的沉积等为特征。高尿酸血症被认为是发展为痛风的前提。当血液中尿酸的浓度持续升高超过了其饱和状态时就会有单钠尿酸盐晶体(monosodium urate crystal,MSU)形成,晶体逐渐沉积在体内某些关节及组织就会发展为痛风。痛风若治疗不及时最终会引起关节残疾,影响人类健康,因此对其治疗至关重要。目前治疗药物主要有:别嘌呤醇、非布司他(抑制黄嘌呤氧化酶活性从而抑制尿酸合成);苯溴马隆、丙磺舒(促进肾脏排泄尿酸)。这些药物虽治疗有效,但有效率未能达到人们的期望水平,且应用过程中会带来一些副作用,甚至危及生命。中医将痛风归于“痹症”的范畴,对痛风的认识历史悠久。随着科学技术的进步、研究的逐步深入,中医中药对痛风的治疗取得了显著的疗效。本文拟在建立可靠高尿酸血症小鼠模型的基础上,筛选出具有降尿酸作用的中药,利用正交设计选出中药复方降尿酸的最优剂量配伍组合,并进一步证实其对高尿酸血症小鼠的降尿酸作用,初步探讨其作用机制,为临床上治疗痛风提供更多的用药依据。方法:1急性高尿酸血症小鼠模型的建立昆明小鼠随机分成3组,每组分别给予氧嗪酸钾盐腹腔注射、次黄嘌呤腹腔注射联合氧嗪酸钾盐皮下注射、生理盐水腹腔注射后,留取血清按试剂盒步骤说明检测血清尿酸水平。2具有降尿酸作用的单味中药的筛选2.1昆明小鼠随机分为正常对照(Control)、模型(Model)、别嘌呤醇(Allopurinol)、黄芪(Astragalus)、黄连(Coptis chinensis)、薏苡仁(Semen coicis)、白芍(Radix paeoniae alba)、青风藤(Sinomenium acutum)组(每组各8只),中药各组、别嘌呤醇组每只小鼠均给予对应药物灌胃,模型组及正常对照组给予相同体积生理盐水灌胃,连续灌胃7d,末次给药后中药各组、别嘌呤醇组、模型组小鼠给予500mg/Kg次黄嘌呤腹腔注射联合400mg/Kg氧嗪酸钾皮下注射造模。采集血清按试剂盒步骤说明检测血清尿酸水平。2.2昆明小鼠随机分为正常对照(Control)、模型(Model)、别嘌呤醇(Allopurinol)、连翘(Forsythia)、金银花(Honeysuckle)、黄芩(Scutellaria)、山慈菇(Cremastra appendiculata)、茵陈蒿(Capillary artemisia)、泽泻(Rhizoma alismatis)、苍术(Rhizoma atractylodis)组(每组各7只),中药各组、别嘌呤醇组每只小鼠均给予对应药物灌胃,模型组及正常组给予相同体积的生理盐水灌胃,连续灌胃7d,末次给药后中药各组、别嘌呤醇组、模型组小鼠给予500mg/Kg次黄嘌呤腹腔注射联合400mg/Kg氧嗪酸钾皮下注射造模。采集血清按试剂盒步骤说明检测血清尿酸水平。3中药复方降尿酸最优剂量配伍组合的筛选3.1中药复方降尿酸最优剂量配伍组合的筛选严格按照正交设计的安排将昆明小鼠随机分成9组,每组7只,同时设立模型组及正常对照组验证模型,9组小鼠均给予对应药物灌胃,模型组及正常对照组给予相同体积生理盐水灌胃,灌胃给药7d,末次给药后各中药复方组、模型组分别给予500mg/Kg次黄嘌呤腹腔注射联400mg/Kg氧嗪酸钾皮下注射造模。采集血清按试剂盒步骤说明检测血清尿酸水平。3.2中药复方最优剂量组合的验证昆明小鼠随机分为中药复方高剂量组、中药复方最优剂量组、中药复方低剂量组、模型组、正常对照组(每组各7只);中药各组每只小鼠均给予对应药物灌胃,模型组及正常对照组给予相同体积生理盐水灌胃,连续灌胃7d,末次给药后中药复方各剂量组、模型组小鼠给予500mg/Kg次黄嘌呤腹腔注射联合400mg/Kg氧嗪酸钾皮下注射造模。采集血清采用试剂盒检测方法检测血清尿酸水平。4中药复方最优剂量组合降尿酸作用的机制研究昆明小鼠随机分为中药复方最优剂量组、正常对照组、模型组、别嘌呤醇组(每组各7只);中药复方最优剂量组、别嘌呤醇组每只小鼠均给予对应药物灌胃,模型组及正常对照组给予同等体积生理盐水灌胃,连续灌胃7d,末次给药后中药复方最优剂量组、别嘌呤醇组、模型组小鼠给予500mg/Kg次黄嘌呤腹腔注射联合400mg/Kg氧嗪酸钾皮下注射造模。造模后小鼠摘眼球取血,采集血清采用酶比色法检测血清尿酸水平,比色法检测血清黄嘌呤氧化酶(XOD)、腺苷脱氨酶(ADA)活性;解剖小鼠肝脏,采用比色法检测肝脏组织黄嘌呤氧化酶(XOD)、腺苷脱氨酶(ADA)活性。结果:1急性高尿酸血症小鼠模型的建立三组血尿酸水平有差异(P<0.05);次黄嘌呤联合氧嗪酸钾组血尿酸水平显著高于正常对照组(P<0.05);氧嗪酸钾组与正常对照组血尿酸水平比较无明显差异(P>0.05)。2具有降尿酸作用的单味中药的筛选模型组血尿酸水平明显升高,与正常对照组相比有差异(P<0.05),说明造模成功;薏苡仁组、连翘组、苍术组、别嘌呤醇组血尿酸值明显低于模型组(P<0.05);黄芪、黄连、青风藤、白芍各组与模型组相比血尿酸无差异(P>0.05);金银花、黄芩、茵陈、山慈菇、泽泻各组与模型组相比,血尿酸值无明显变化(P>0.05);薏苡仁组与黄芪、黄连、青风藤、白芍各组相比血尿酸水平明显下降(P<0.05);连翘组、苍术组与金银花、黄芩、茵陈蒿、山慈菇、泽泻各组相比血尿酸水平明显下降(P<0.05);薏苡仁组、连翘组、苍术组血尿酸水平高于别嘌呤醇组(P<0.05)。3中药复方降尿酸最优剂量配伍组合的筛选3.1中药复方降尿酸最优剂量配伍组合的筛选通过正交设计筛选出的3种中药最优剂量配伍组合为:薏苡仁(4g/Kg),连翘(4g/Kg),苍术(2.5g/Kg),此时降尿酸作用最佳。3.2中药复方最优剂量组合的验证中药复方高、最优、低剂量组血尿酸值明显低于模型组(P<0.05);中药复方高、最优、低剂量组间血尿酸水平有明显差异(P<0.05);中药复方最优剂量组血尿酸水平下降最明显,与中药复方高、低剂量组相比有差异(P<0.05),与正交设计阶段各组血尿酸相比明显下降,说明采用此剂量组合较稳定。4中药复方最优剂量组合降尿酸作用的机制研究模型组血尿酸值明显高于正常对照组(P<0.05);中药复方最优剂量组、别嘌呤醇组血尿酸水平明显下降,与模型组相比有统计学差异(P<0.05);模型组肝脏组织XOD、ADA活性及血清XOD、ADA活性明显高于正常对照组(P<0.05);中药复方最优剂量组较模型组肝脏组织XOD、ADA活性及血清XOD、ADA活性下降明显(P<0.05);别嘌呤醇组较模型组肝脏组织XOD、ADA活性及血清XOD、ADA明显下降(P<0.05);中药复方最优剂量组肝脏组织XOD、ADA活性及血清XOD、ADA活性较别嘌呤醇组偏高,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1按次黄嘌呤500mg/Kg剂量腹腔注射联合氧嗪酸钾400mg/Kg剂量皮下注射可建成稳定的急性高尿酸血症小鼠模型;2通过正交设计筛选出具有降尿酸作用的3味中药最优剂量的配伍组合为:薏苡仁(4g/Kg)、连翘(4g/Kg)、苍术(2.5g/Kg);3中药复方最优剂量组可以明显降低高尿酸血症小鼠血尿酸水平,它可能是通过抑制肝脏XOD、ADA的活性及血清XOD、ADA的活性来发挥降尿酸的作用。