背景：　　骨肉瘤多发于青少年，并时常好发于病患的四肢，患者多最终因骨肉瘤细胞肺部转移而死亡。YAP/TAZ是近来发现与肿瘤发生发展的密切相关的重要因子，作为Hippo通路的下游效应分子，在整个通路中起着中心开关的作用。在细胞正常的发育过程中，YAP(Ybs-associatedprotein)作为一个转录共激活因子，与转录因子T E A D结合，并促使下游基因的表达升高，从而使细胞增殖。TAZ(Transcriptionalcoactivator withPDZ-bindingmotif)是YAP的旁系同源蛋白，在肿瘤中也发挥着类似的功能。同时，YAP/TAZ参与肿瘤的侵袭、转移等相关研究已在乳腺癌、前列腺癌中得到充分验证。以上这些都为研究YAP/TAZ与骨肉瘤发生发展提供了相关的实验基础与依据。通过研究YAP/TAZ在骨肉瘤形成过程中的具体机制，可以为治疗与预防骨肉瘤的发生及其转移提供一些新的想法，从而为骨肉瘤患者的治疗和康复提供支持。　　目的：　　验证YAP/TAZ在骨肉瘤组织中的异常表达和不同侵袭能力骨肉瘤细胞系中的差异表达；探究YAP/TAZ对骨肉瘤细胞系增殖、侵袭和迁移能力的影响，为骨肉瘤的分子靶向治疗提供理论基础。　　方法：　　1.采用实时定量PCR和Westem Blot检测YAP/TAZ在不同骨肉瘤细胞系及正常成骨细胞中的表达，包括SOSP-9607、SOSP-9607高转移株F5M2、SOSP-9607低转移株F4、MG-63、SAOS-2、U2-OS。利用免疫组织化学染色，对47例骨肉瘤组织及20例骨软骨瘤组织中的YAP/TAZ进行检测。　　2.采用 DharmaFECTTrans&ctionReagents将siRNA片段，瞬时转染导入F5M2肿瘤细胞内，抑制YAP/TAZ表达并构建YAP/TAZ低表达的骨肉瘤细胞模型。　　3.对所构建的细胞模型进行肿瘤细胞功能实验，包括CCK8法检测肿瘤细胞增殖能力；流式细胞仪法检测肿瘤细胞周期和凋亡程度；Tmnswell法检测肿瘤细胞迁移、侵袭能力；共聚焦显微镜及扫描电镜观察细胞骨架及微丝、伪足等与转移相关的组织结构。　　结果：　　1.通过q R T-P C R、Westem B l o t实验验证得出，Y A P/T A Z在骨肉瘤高转移株F5M2中表达量高于骨肉瘤低转移株F4，同时YAP/TAZ在各肿瘤系中的表达明显高于其在成骨细胞系中的表达。在47例骨肉瘤临床标本中，YAP/TAZ阳性率分别为74.5％和59.6%。20例骨软骨瘤临床标本中，YAP/TAZ阳性率分别为30%和15%。　　2.将siRNA片段成功导入F5M2骨肉瘤细胞系中，qRT-PCR、WestemBlot结果显示，YAP/TAZ表达明显降低，证明下调成功。　　3. CCK8细胞增殖实验显示，对比未进行下调处理的F5M2细胞系，下调后的F5M2生长速率明显下降。流式细胞仪细胞周期和细胞凋亡实验显示，下调Y A P的骨肉瘤细胞F5M2与对照组相比，各周期肿瘤细胞比例亦无明显差异，凋亡率无统计学差异。Transwell细胞侵袭和迁移实验显示，骨肉瘤高转移株F5M2的转移、迁徙能力明显强于低转移株F4;而下调Y A P的F5M2组较对照组，其转移、迁徙能力明显下降。　　4.在共聚焦显微镜下观察细胞的骨架结构显示，下调YAP的骨肉瘤高转移株F5M2细胞，外围光滑，几乎没有突起和伪足的形成，F-actin在胞质内呈网状排列。而对照组的F-actin表达量高于下调组细胞，F-actin的纤维形态和排列紧密，伪足数量多。同样，扫描电镜下观察细胞，下调组细胞伪足、微绒毛明显少于对照组，细胞发生一定变形。　　结论：　　1. YAP/TAZ在骨肉瘤组织中高表达，且高侵袭性骨肉瘤细胞中YAP/TAZ表达明显高于低侵袭性骨肉瘤细胞系，说明YAP/TAZ参与了肿瘤的发生及转移，且其与肿瘤的侵袭能力呈正相关。　　2.通过建立YAP/TAZ下调的肿瘤细胞模型，验证了 Y A P对骨肉瘤细胞增殖、侵袭及迁移能力的促进作用，为进一步研究YAP促进骨肉瘤细胞增殖和转移的分子机制研究打下基础。　　3. Y A P对骨肉瘤细胞系F5M2的细胞周期及凋亡并无明显影响，YAP/TAZ对肿瘤细胞周期和凋亡的作用可能具有组织特异性。