论文部分内容阅读
第一部分普萘洛尔治疗难治性婴幼儿血管瘤的临床观察目的观察普萘洛尔治疗难治性婴幼儿血管瘤的临床疗效及安全性。方法给68例通过临床和辅助检查诊断的难治性婴幼儿血管瘤患儿给予普萘洛尔,1.0～2.0mg/kg/d,分2-3次口服,每月复诊1次观察和记录血管瘤大小、质地、颜色的变化等,并随时处理治疗过程中出现的不良反应。按4级评分法对近期疗效进行评价。结果68例随访3-13个月,疗效：Ⅰ级8例,Ⅱ级：13例,Ⅲ级：29例,Ⅳ级：13例。68例均未发生严重不良反应,但均未有1例完全消褪。结论1.小剂量普萘洛尔(1～2mg/kg/d)治疗难治性婴幼儿血管瘤疗效确切,不良反应轻微,可作为难治性婴幼儿血管瘤的首选治疗药物,治疗的剂量及疗程宜个体化,服药、停药时宜逐增、逐减。2.婴幼儿难治性血管瘤经口服普萘洛尔治疗后皮损不能完全消退,局部可出现疤痕、色脱等,所以诊断一旦明确,宜尽早治疗,必要时可结合局部治疗去除残余病变组织。第二部分普萘洛尔影响HUVEC-12细胞分泌VEGF的胞内信号机制研究目的通过研究普萘洛尔对HUVEC-12细胞(Human Umbilical Vein Endothelial cells)分泌VEGF (Vascular Endothelial Growth Factor)的影响以及相关的信号通路,进一步探讨普萘洛尔治疗难治性血管瘤的分子生物学机制。方法以离体培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC-12)为模型,用浓度分别为16ug/ml、8ug/ml、4ug/ml、2ug/ml、1ug/ml、0ug/ml(空白对照)的普萘洛尔干预,采用ELISA法检测各组细胞培养上清液(cultural supernatants, CS)中VEGF的浓度。用MTT法检测VEGF促进血管内皮细胞增殖的最佳浓度,建立阳性系统,在此基础上用Western印迹法检测不同浓度普萘洛尔干预后p-JNK(磷酸化的JNK)和p-P38(磷酸化的P38)的表达.结果1.不同浓度普萘洛尔组的细胞毒作用在细胞毒实验中HUVEC-12细胞在接受不同浓度的普萘洛尔干预后,MTT检测结果显示实验组与空白对照组比较,不同浓度的普萘洛尔对人血管内皮细胞细胞毒作用均无统计学意义(P>0.05)2.不同浓度普萘洛尔组CS中VEGF的浓度普萘洛尔干预组CS中VEGF的浓度在16ug/ml,8ug/ml,4ug/ml, 2ug/ml, 1ug/ml与空白对照组相比均下降(P<0.05),有显著统计学差异,在普萘洛尔浓度为8ug/ml时下降最明显。3.不同浓度的VEGF对人血管内皮细胞的增殖影响在细胞增殖实验中HUVEC-12细胞在接受为40ng/ml,20ng/ml, 10ng/ml,5ng/ml,2.5ng/ml的VEGF干预48h后,与空白对照组相比,VEGF对人血管内皮细胞有促进增殖的作用,当浓度为20ng/ml时最为明显(P<0.001)。4.普萘洛尔干预组中p-JNK和p-p38的表达：p-JNK和p-P38信号均先增强后减弱,P-Jnk在普萘洛尔浓度为1ug/ml表达最明显,而P-P38在普萘洛尔浓度为4ug/ml时表达最明显,在普萘洛尔浓度为16ug/ml时两者都有下降。结论1.普萘洛尔对静脉内皮细胞分泌VEGF有抑制作用,在浓度为8 ug/ml时对静脉内皮细胞分泌VEGF的抑制作用最明显。2.P38、JNK激酶在普萘洛尔影响HUVEC-12细胞分泌VEGF的过程中起重要作用,在普萘洛尔高浓度时通过下调血管内皮细胞的胞内JNK和P38信号转导,降低VEGF的增殖效应从而促进血管瘤的消退。