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体内条件性细胞剔除能够特异性地剔除我们希望去除的细胞,帮助我们研究细胞的功能以及各种细胞之间的相互作用,能够解答关于特殊细胞的谱系和发育或生理学功能的问题。为了能够在体内剔除细胞,逐渐研究出像物理消融法、细胞毒素的抗体、化学药物、胸苷激酶、硝基还原酶等细胞敲除方法,然而这些方法都存在着许多缺点。近年来产生了一种利用白喉毒素受体的转基因表达以及注射白喉毒素来剔除特定细胞的新体内细胞敲除方法。子宫主要由子宫内膜、基质、上皮以及各种免疫细胞组成。本实验利用PRCre/+、Amhr2Cre/+、LtfCre/+与pCAG-STOP-DTR-2A-EGFP小鼠交配,得到PRCre/+/pCAG-STOP-DTR-2A-EGFP、Amhr2Cre/+/pCAG-STOP-DTR-2A-EGFP、LtfCre/+/pCAG-STOP-DTR-2A-EGFP的小鼠,分别称这些小鼠为PR-DTR、Amhr2-DTR和Ltf-DTR。利用免疫组化、Western blotting等方法,证明了得到的三种小鼠在子宫的不同部位特异性表达DTR。对pCAG-STOP-DTR-2A-EGFP小鼠腹腔注射DT,结果显示每次注射DT 10ng/只,连续注射两天会导致小鼠1-3天后死亡;每次注射DT 5ng/只,连续注射三天会导致小鼠状态变差甚至死亡;每次注射DT 5ng/只,连续两天注射,最高耐受量为10ng;每次注射DT 1ng/只,连续注射三天,对小鼠无影响。将PR-DTR、Ltf-DTR、DTR和WT雌鼠与健康的成年雄鼠交配,在雌鼠妊娠第二天和第三天,每天注射DT 1ng/只,妊娠第四天取材,观察子宫形态,PR-DTR小鼠的子宫红肿膨大,Ltf-DTR小鼠的子宫与野生型小鼠子宫相比,并无明显变化。通过HE染色观察到PR-DTR小鼠子宫中出现异常的腔,Ltf-DTR小鼠子宫与野生型小鼠子宫相比无明显差异。免疫组化验证了FOXA2在注射DT的PR-DTR小鼠子宫中表达,以上实验证明DT在PR-DTR小鼠子宫中起作用,能够剔除子宫中表达DTR的细胞。向Ltf-DTR雌鼠注射DT,12 h后取材,观察子宫外部形态,发现子宫肿大,利用HE染色观察内部形态,内部上皮细胞排列松散,腺上皮脱落,说明注射DT 12 h时能够在Ltf-DTR雌鼠子宫中起作用。上述实验结果表明,PR-DTR小鼠可用来建立剔除子宫内膜、基质和上皮细胞的模型,Ltf-DTR小鼠可以用来建立剔除上皮细胞的模型。由此可见,这些转基因鼠可以用于研究子宫中不同区域细胞的发生和发展、子宫中细胞之间的相互作用,可以用Ltf-DTR小鼠剔除上皮细胞的特点研究月经周期时子宫中的各种生理功能,也可以作为研究各种子宫疾病的模型。