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转基因动物技术可以加快家畜品种的改良速度，提高肉、奶、蛋的产量和品质。而转基因动物最诱人的前景作为动物乳腺生物反应器，可以利用它来生产人类所需要的生物活性产品或药物。然而生产转基因动物效率低和外源基因表达受位置效应影响是目前研究动物乳腺生物反应器的最主要问题。基因打靶技术是解决上述问题的重要途径，但是基因打靶存在打靶效率太低的问题。利用动物细胞核仁组织区存在的非编码DNA重复序列作为靶位点的多位点基因打靶技术，使靶位点增加200-300个，能将使基因定点整合效率提高200-300倍，但这还远不能满足于更高效的基因打靶研究与应用要求。而利用锌指核酸酶对靶位点进行切割从而启动细胞内DNA的同源重组修复机制的技术，有望将基因同源重组打靶的效率提高10000-20000倍。本研究小组主要通过多位点基因打靶载体结合锌指核酸酶来进行转基因研究。主要研究内容如下：
1)成功克隆了奶牛rDNA(rRNA基因)的同源重组引导序列(HRDS1，HRDS2)，以及绿色荧光蛋白基因(GFP)。
2)以乳腺特异性表达载体pBC1为基础加入同源重组引导序列HRDS1，HRDS2，以及绿色荧光蛋白基因GFP作为标记性蛋白，成功构建了奶牛乳腺特异性表达多位点基因打靶载体pBC1—HRDS2—GFP—HRDS1。
3)将已构建好的一对锌指核酸酶AF、DF克隆到真核表达载体pcDNA3.1。
4)将奶牛乳腺特异性表达多位点基因打靶载体pBC1—HRDS2—GFP—HRDS1和锌指核酸酶表达载体采用阳离子脂质体介导法共转染水牛耳尖成纤维细胞进行，24h观察到绿色荧光细胞。
5)对水牛耳尖成纤维细胞的基因组进行转基因鉴定，采用PCR扩增得到绿色荧光蛋白基因GFP，证明GFP已转入细胞。