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实验目的心肌缺血再灌注损伤是临床上冠心病急性心肌梗死再灌注治疗中的难题。已有动物实验发现,黄芪多糖具有较好的抗心肌缺血再灌注损伤的作用,而本实验中我们主要研究黄芪多糖对人心脏微血管内皮细胞缺血再灌注损伤的影响,从而更有针对性地探讨中药黄芪在抗心肌缺血再灌注损伤中的作用。实验方法1人心脏微血管内皮细胞(HCMEC)的培养:经过对HCMEC的复苏、培养、传代,建立稳定的细胞实验平台。2黄芪多糖对正常培养的HCMEC的细胞增殖实验:通过MTT法检测细胞活性变化,观察正常培养下的HCMEC经不同浓度、不同时间的黄芪多糖处理后细胞的增殖情况。3黄芪多糖对缺血再灌注损伤的HCMEC活性的影响:以缺氧缺糖模拟缺血,复氧复糖模拟再灌注,通过MTT法比较HCMEC经不同浓度的黄芪多糖处理后细胞活性的变化。4黄芪多糖对缺血再灌注损伤的HCMEC P-选择素、E一-择素表达的影响:以细胞ELISA法观察在缺血再灌注早期不同浓度的黄芪多糖对P-选择素和E-选择素表达的影响。实验结果1复苏后的HCMEC胞体肥厚、透明,呈菱形或多角形,核小而圆,细胞单层生长,呈铺路石样生长,符合内皮细胞的特征。2经不同浓度的黄芪多糖干预24h,浓度为151.25μg/mL～18.78μg/mL时,与正常对照组相比可促进HCMEC的增殖,其中,18.78μg/mL和151.25μg/mL两个浓度组促增殖作用不显著,而37.56μg/mL和75.13μg/mL两个浓度组与正常对照组比有明显差异。用25、50、100μg/mL的黄芪多糖处理HCMEC4h、6h、8h后,细胞增殖无显著性增加。3 HCMEC体外模拟缺血2h再灌注6h与对照组相比,HCMEC活性明显降低,不同浓度的黄芪多糖组的OD值均高于模型组,HCMEC活性增加。4 HCMEC体外模拟缺血2h再灌注6h P-选择素和E-选择素蛋白表达明显增加,而中、高两个剂量的黄芪多糖均能明显抑制P-选择素和E-选择素蛋白的表达,而低剂量抑制作用则不明显。实验结论1黄芪多糖在一定剂量范围内可适当促进正常培养下的HCMEC增殖,但作用起效较慢,至少需要大于8h。2黄芪多糖在一定浓度范围内能够明显保护缺血再灌注损伤的HCMEC。3一定浓度的黄芪多糖在缺血再灌注早期可降低P-选择素和E-选择素蛋白的表达。