前言 血管成形术后再狭窄(RS)的发生严重制约了此技术的发展，有研究提示，血管平滑肌细胞(VSMC)是形成RS的基础，VSMC的迁移、增殖、分泌和凋亡导致了血管RS的发生、发展和转归，而细胞凋亡在其中的作用逐渐受到人们的重视，认为凋亡不足可能是RS发病的关键因素。参与调节细胞凋亡的基因有很多，其中研究较多的是Bcl-2和Bax，二者的比例决定细胞是否发生凋亡，比值增高细胞趋于存活，比值降低，细胞趋于凋亡。有关RS的防治研究很多，药物治疗以其具有无创、价廉的优点易为病人所接受，但迄今为止，尚未发现一种确实有效的药物。 通心络是一种复方中药制剂，有研究证明通心络可以抑制血管内皮损伤后的内膜增殖，但其对内皮损伤后的细胞凋亡有何影响尚未见报道，本研究通过构建家兔动脉粥样硬化和血管成形术模型，使用通心络做药物干预，以探讨通心络对血管成形术后家兔细胞凋亡及基因蛋白表达的影响。 实验材料与方法 一、建立动物模型 1．实验动物：日本纯种雄性大耳白兔60只，体重2.5±0.5Kg，月龄6～8个月。 2．动脉粥样硬化及血管成形术模型的建立：家兔适应性饲养1周，随机分为三组：单纯拉伤组、高脂拉伤组、通心络治疗组，每组20只，单纯拉伤组喂普通饲料200g／d；高脂拉伤组和通心络治疗组喂普通饲料加胆固醇，普通饲料150岁d，胆固醇1 .5岁夕kg。喂养4周后行腹主动脉内皮剥脱术，术后喂养同前，4周后动物在X光下先行腹主动脉造影，然后对其造影显示狭窄>30%的部位进行球囊扩张，再次造影，狭窄消失为扩张成功，共成功建立家兔血管成形术模型45只。 二、血管组织切片的制备及病理学检测 处死动物前自心脏左室活体灌注4%多聚甲醛，灌流固定，暴露从主动脉至股动脉全长血管，取PTCA部位血管1 .0。m，以多聚甲醛固定，石蜡包埋后，连续切片，分别作HE染色、细胞凋亡检测(TUNEL法)及PCNA、Bd一2和Bax的免疫组化染色。染色后用计算机图像分析系统测算阳性细胞的光密度值。实验结果 1 .HE染色结果显示:高脂拉伤组可见明显新生内膜形成，内膜、中膜增生明显，通心络治疗组病变程度较高脂拉伤组轻。 2.免疫组化结果 1) PcNA及凋亡细胞的表达结果 高脂拉伤组的PCNA表达增多，遍及整个血管全层，通心络治疗组PCNA表达明显减少，两组阳性细胞光密度差异显著(P<0.05)。凋亡细胞表达则正好相反，高脂拉伤组少见，通心络组明显增多，二者阳性细胞数差异显著(P<0.05) 2)Bcl一2和Bax的表达结果 高脂拉伤组Bcl一2的表达较单纯拉伤组明显升高，通心络治疗组表达下降，阳性细胞光密度相比差异显著(P<0.05)。Bax表达在高脂拉伤组较单纯拉伤组降低，通心络治疗组表达明显上升，阳性细胞光密度相比差异显著(P<0.05)。讨论 细胞凋亡是不同于细胞坏死的另一种死亡形式，它是一种耗能的程序性细胞死亡过程。血管可以通过凋亡机制清除部分增殖的SMC，SMC的增殖和凋亡之间的平衡决定着:SMC的正常数量，凋亡率低，容易发生SMC的过度积聚，形成RS。本研究显示，高脂拉伤组家兔VSMC凋亡率明显降低，而给予通心络的家兔凋亡细胞明显多于高脂拉伤组。 原癌基因Bcl一2的蛋白表达产物具有抑制细胞凋亡的效应，其作用与Bax基因的蛋白表达产物相反，Bax过度表达导致细胞凋亡。Bcl一2与Bax的比例可能是决定该细胞是否发生凋亡的重要因素。本实验结果显示，高脂拉伤组家兔VSMc中Bcl一2蛋白表达较单纯拉伤组明显增加，而Bax蛋白表达降低，这可能与其细胞凋亡减少有一定关系，通心络治疗组家兔vsMc中Bcl一2蛋白表达较高脂拉伤组明显减少，而Bax蛋白表达则增加。本实验中通心络下调血管成形术后vSMC的Bd一2蛋白表达，并一定程度上调Bax蛋白表达，表明其促进VSMC凋亡作用可能与其参与下调细胞凋亡抑制基因Bd一2的蛋白表达，并上调细胞凋亡促进基因Bax的蛋白表达有密切的联系。 总之，实验结果说明，家兔血管成形术后vSMC凋亡减少，VSMC的Bd一2蛋白表达上调，Bax蛋白表达下调;通心络可以促进vSMC凋亡，且具有明显下调Bcl一2蛋白表达，上调Bax蛋白表达的作用。结论 1.Bd一2和Bax参与了家兔动脉粥样硬化血管成形术后VSMC的调节。 2.通心络可以促进家兔动脉粥样硬化血管成形术后血管局部SMC的凋亡，其作用与下调Bd一2的表达和上调Bax的表达相关。