胰腺癌是一种恶性程度极高、治疗困难的消化系统肿瘤。临床上80%以上的胰腺癌患者在确诊时即为中晚期且多伴有远处转移,从而失去最佳手术时机。据资料显示胰腺癌5年生存率低于1%,预后极差。因此,化疗成为治疗中晚期胰腺癌的主要手段。然而目前常用的化疗药物反应率并不高,且毒副作用较大。故临床上急需寻找新型有效低毒的抗胰腺癌药。厚朴酚是从植物厚朴树的皮、根、茎中提取出的烯丙基连苯二酚类天然化合物,与和厚朴酚互为同分异构体。厚朴酚不但有中枢神经抑制作用,抗菌,抗病原微生物,抗溃疡作用,而且还具有抗炎,抗氧化,抗肿瘤,抑制血小板聚集等药理作用。此外,研究发现厚朴酚可诱导肿瘤细胞凋亡,还能够诱发细胞自噬,负向调控血管生成,从而抑制多种恶性肿瘤细胞的增殖。目的为了探究厚朴酚治疗胰腺癌的临床意义,在本研究中我们探讨厚朴酚对人四种胰腺癌细胞株增殖、凋亡和周期的影响以及厚朴酚体外抗胰腺癌细胞转移活性的功能,同时还研究了厚朴酚体外抗胰腺癌的机制。方法(1)CCK-8检测不同浓度厚朴酚对人四种胰腺癌细胞株(PANC-1,CFPAC-1,ASPC-1,MIAPa Ca-2)增殖的影响。(2)Hochest染色法检测不同浓度厚朴酚(0,40,80,120μmol/L)对人四种胰腺癌细胞株凋亡的影响。(3)流式细胞术检测不同浓度厚朴酚对人四种胰腺癌细胞株凋亡发生率的影响。(4)流式细胞术检测不同浓度厚朴酚对人四种胰腺癌细胞株周期的影响。(5)细胞基质粘附实验检测不同浓度厚朴酚对人四种胰腺癌细胞株粘附力作用。(6)细胞划痕实验检测不同浓度厚朴酚对人四种胰腺癌细胞株迁移能力作用。(7)Transwell小室重建基底膜侵袭实验检测不同浓度厚朴酚对人四种胰腺癌细胞株侵袭力作用。(8)Western bloting法检测厚朴酚对组织蛋白酶D(CTSD)蛋白表达的影响。(9)不同浓度厚朴酚处理MIAPa Ca-2细胞24h后,用Caspase-3分光光度法检测细胞内Caspase-3活性。(10)CTSD抑制剂(pepstatin A)预处理MIAPa Ca-2细胞24h后应用厚朴酚(40μmol/L)再次作用胰腺癌MIAPa Ca-2细胞,用流式细胞术检测厚朴酚及pepstatin A对胰腺癌MIAPa Ca-2细胞凋亡的影响。(11)pepstatin A(100μmol/L)预处理MIAPa Ca-2细胞24h后应用厚朴酚(40μmol/L)再次处理胰腺癌MIAPa Ca-2细胞,用Caspase-3分光光度法检测细胞内Caspase-3活性变化。结果(1)不同剂量厚朴酚作用于四种胰腺癌细胞24 h,48 h,72 h后,均能抑制细胞的增殖作用,且厚朴酚在体外能以剂量和时间依赖方式抑制四种胰腺癌细胞的生长。(2)Hochest33258染色和流式细胞术实验发现厚朴酚能够促进细胞的凋亡、阻滞细胞周期的S期。(3)细胞粘附实验、细胞划痕实验和细胞侵袭实验证实了厚朴酚具有抑制胰腺癌细胞的粘附、侵袭、转移的作用。(4)Western bolting法检测厚朴酚作用胰腺癌细胞后,其胞浆中CTSD的表达明显增多。再次利用CTSD抑制剂(pepstatin A)和厚朴酚作用胰腺癌细胞后,用Caspase-3分光光度法检测细胞内Caspase-3含量的改变,其胞浆中的Caspase-3蛋白表达量与对照组相比并未发生明显变化,进一步证明了厚朴酚诱导细胞凋亡的机制是上调CTSD的表达,诱发Caspase-3的活化,最终诱导胰腺癌细胞凋亡。结论厚朴酚对人四种胰腺癌细胞株不仅具有明显抑制增殖、促进凋亡的作用,而且减弱了胰腺癌细胞的侵袭、转移能力。同时,厚朴酚诱导细胞凋亡的机制可能是启动CTSD参与细胞凋亡途径,上调CTSD的表达,诱发Caspase-3的活化,最终诱导胰腺癌细胞凋亡。