大部分的陆地植物都能与丛枝菌根真菌形成共生,丛枝菌根能够促进植物的营养吸收,提高植物的抗逆性,对植物的生长发育具有重要作用。柑橘根毛稀少,需要依赖与丛枝菌根真菌形成互惠共生体来吸收水分和矿质营养,因此研究柑橘菌根共生具有重要的科学意义。目前关于柑橘丛枝菌根的研究主要集中在生理方面,分子水平的研究甚少。课题组前期研究发现一些miRNA可能参与了柑橘丛枝菌根共生过程的调控,但其功能尚不清楚。本研究一方面探究了枳miR169及miR159b对丛枝菌根共生的调控作用,另一方面,基于前人研究结果挖掘调控苜蓿丛枝菌根共生相关的miRNA。通过该研究深入理解miRNA介导的转录后水平的调控在菌根共生中的作用机制。本研究的主要内容及结果如下:1.枳miR169前体超表达稳定转化枳,以转空载为对照,获得的阳性植株接种丛枝菌根真菌Rhizophagus irregularis（Ri）后用于基因表达量和表型检测。结果表明转基因阳性植株中的miR169显著上调表达,但其三个预测的靶基因无变化;采用WGA488染色法检测根系菌根表型,发现miR169超表达植株与转空载对照植株的菌根侵染率和丛枝丰度均未表现出显著差异。2.枳miR159b前体超表达瞬时转化苜蓿,以转空载为对照。进行了两次独立的遗传转化实验,获得的阳性植株接种丛枝菌根真菌Ri后用于基因表达量和表型检测。表达量检测结果显示其中一次转化实验得到的阳性植株中miR159b显著上调表达,但另一次转化实验得到的阳性植株中miR159b显著下调表达。采用醋酸墨水染色法检测根系菌根表型,发现miR159b上调表达的植株其菌根侵染率和丛枝丰度与空载对照相比无显著差异,但miR159b下调表达的植株尽管其菌根侵染率与空载对照无差异,但其丛枝丰度显著下降,这说明miR159b的表达与菌根共生密切相关。3.以前人发表的138个苜蓿丛枝菌根共生保守的基因为基础,通过ps RNATarget网站预测靶定这138个基因的miRNA,得到了13个家族的32个miRNA。以接种和不接种丛枝菌根真菌Ri的苜蓿根系为材料,通过实时定量PCR成功检测到8个家族的27个miRNA的表达量,其中miR5037a/b/c在接种Ri的苜蓿根系中显著上调表达,而miR2630i-v显著下调表达,推测这两个miRNA可能参与了丛枝菌根共生调控。