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毛木耳(Auricularia cornea)是世界上木耳属中分布最广的药食同源性真菌,也是我国木耳属中的大宗栽培品种,目前我国已经成为了全世界毛木耳生产量和出口量最大的国家。但是与蓬勃发展的毛木耳产业形成鲜明对比的是,子实体颜色性状与内在色素物质关联性方面的基础研究极为薄弱,甚至连最重要的颜色属性都仅仅是靠肉眼观察,对毛木耳子实体的颜色性状难以形成定量化的描述,这严重阻碍了毛木耳的颜色育种和应用进程。因此,本研究在团队预测了毛木耳色素合成途径的前提下,对毛木耳进行黑色素提取,优化提取工艺,并对提取出的黑色素结构进行表征及理化性质测定;对毛木耳颜色进行定量化、数据化的评价,分析黑色素与毛木耳颜色性状和胶质含量的相关性;在本团队获得的毛木耳全基因组及注释色素合成关键酶基因(谷氨酰胺酰胺基转移酶)G11815的基础上,采用qRT-PCR方法,筛选稳定表达的内参基因做参照,对G11815在褐色和白色毛木耳中的表达情况进行测定,验证白色毛木耳的合成机理。旨在为探索颜色与内在色素物质的关系及毛木耳颜色定向育种提供新途径,为培育更多不同颜色的食用菌新品种提供科技支撑。主要试验结果如下:1.毛木耳黑色素的提取、表征及理化性质研究(1)毛木耳黑色素最佳提取工艺条件为:氢氧化钠溶液浓度1.5mol/L、料液比1:30(g/mL)、浸提时间1h。(2)鉴定试验结果表明,毛木耳黑色素具有碱溶性和疏水性,不溶于酸溶液和有机溶剂中;黑色素在波长210nm处有最大吸收峰;黑色素结构为邻苯二酚型。(3)稳定性试验结果表明,毛木耳黑色素经过100℃水浴1h后消耗率为25.20%,在白炽灯光处理下消耗率高达39.81%,经鉴定毛木耳热稳定性高于光稳定性。抗氧化性试验结果表明,当毛木耳黑色素浓度在0.5mg/mL以上时,对DPPH自由基清除率可达60%以上,IC50为0.46mg/mL。2.毛木耳黑色素含量与子实体颜色、胶质含量的相关性(1)以黑色(L*=0,a*=0,b*=0)做基底标样,对毛木耳颜色的评价结果显示,毛木耳子实体颜色为褐色系,腹面颜色为黑色偏红缺蓝,亮度偏亮;背面颜色为黑色缺绿缺蓝,亮度偏亮。采用Moquent数学模型对毛木耳子实体颜色进行分析,发现毛木耳子实体颜色性状具有一定的连续性。(2)毛木耳黑色素含量与子实体腹面颜色L*值呈显著负相关,相关系数为﹣0.506;与胶质含量呈极显著负相关,相关系数为﹣0.714。(3)筛选出黑色素得率高的优良菌株AP17。3.内参基因筛选及色素合成关键酶基因G11815的表达验证(1)选取3株褐色毛木耳和3株白色毛木耳,在毛木耳转录组数据中挑选β-微管蛋白(β-TUB)、葡萄糖磷酸变位酶(PGM)、葡萄磷酸糖异构酶(PGI)、质膜质子ATP酶(H+-ATPase)这4种常见的内参基因做候选,设计引物,筛选出褐色毛木耳中最适内参基因为PGM,白色毛木耳中最适内参基因为H+-ATPase。(2)毛木耳色素合成关键酶基因(谷氨酰胺酰胺基转移酶)G11815的表达测量结果显示,在褐色毛木耳中G11815的相对表达量是白色毛木耳380倍。验证了G11815是毛木耳的色素合成关键酶基因,明确了白色毛木耳子实体呈现白色的原因是G11815表达被抑制或表达缺失造成的。