NF-κB信号通路在大鼠放射性肺损伤中的变化及意义

来源 :广西医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:lelefeng123
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研究目的探讨TNF-?及其相关NF-κB信号转导通路在大鼠放射性肺损伤中的变化及其意义。进一步探索放射性肺损伤的分子机制。研究方法随机将48只健康的雄性SD大鼠分为两组:正常对照组、照射组。正常对照组不做照射处理。照射组大鼠麻醉后用60钴治疗机单次16Gy照射右全肺;分别于照射后第2周、5周、12周、24周末,各组大鼠中随机取5只处死,取其右肺组织进行HE和Masson染色;采用碱水解法检测各组大鼠肺组织中羟脯胺酸的含量变化;免疫组织化学法检测肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、核转录因子-κB P65(NF-κB p65)、转化生长因子-?1(TGF-?1)、白细胞介素-10(IL-10)的表达,免疫组化染色利用计算机图像分析系统进行定量测定;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中IL-10的含量;采用蛋白免疫印迹技术(Western Blotting)检测大鼠肺组织磷酸化NF-κB p65及NF-κB p65的表达。实验结果(1)大鼠肺组织学观察结果:正常对照组大鼠肺组织在各时间点肺泡结构完整,无明显充血、水肿、渗出。16Gy照射组大鼠肺组织照射后第2、5周末可见充血、水肿、炎症细胞浸润的病理改变,第12、24周末可见肺泡壁增厚、肺组织纤维化。(2)大鼠肺组织羟脯氨酸(HYP)含量:16Gy组羟脯氨酸含量随照射后时间的延长逐渐增加,直到第24周末实验结束,与正常对照组比较,其含量高于对照组(p<0.05)。(3)大鼠肺组织肺组织中TNF-α表达:正常对照组TNF-α几乎不表达,从照射后第2周末至第24周末,16 Gy组TNF-?表达呈现先升高后下降再升高的趋势,且16 Gy组TNF-?阳性表达在第5周末达高峰;各时间点16Gy组与正常对照组相比TNF-α表达均增强(P<0.05)。(4)大鼠肺组织中NF-κBp65表达:(1)免疫组化结果:照射组大鼠肺组织中NF-κB p65表达随照射后时间延长,呈现先升高后下降再升高的趋势。从照射后第2周末开始,照射组大鼠肺组织NF-κB p65表达增多,到照射后第5周末达高峰,第12、24周末降低,各时间点NF-κB p65表达与正常组比较,均高于正常组(P<0.05)。(2)蛋白印迹结果:照射后各时间点内,照射组NF-κB p65表达均高于正常组,p<0.01;照射组照射后第2周末与第12、24周末比较,p<0.05;与第5周末比较,p>0.05;第5周末与第12、24周末比较,p<0.05;第12周末与第24周末比较,p<0.05。(5)大鼠肺组织中NF-κB p-p65表达:大鼠肺组织中p-p65含量从照射第2周末明显增多,至第5周末达高峰后逐渐下降,到第24周末又升高,且高于第2周末。呈现先升高后下降再升高的趋势。照射组照射后第2周末与第5、12周末比较,p<0.05;第5周末与第12、24周末比较,p<0.05;第12周末与第24周末比较,p<0.05。(6)(1)大鼠肺组织IL-10表达:照射后第2周末,16 Gy照射组可见大量的阳性细胞,到照射后第5周末达最大,第12、24周末降低,低于第2周末,IL-10表达呈现先升高后下降的趋势。(2)大鼠血清IL-10含量变化:正常对照组各时间点血清IL-10含量无明显差异,在照射后各时间点,与正常组比较,照射组大鼠血清中IL-10含量明显升高,p<0.05,差异有统计学意义;照射组大鼠血清中IL-10在照射后第2周末明显升高,至第5周末达最大,第12、24周含量下降,但仍高于正常对照组。照射组照射后各时间点大鼠血清IL-10含量两两比较,p<0.05。(7)大鼠肺组织TGF-?1表达:照射组受照射后大鼠肺组织TGF-?1表达,16Gy组照射后TGF-?1表达随照射后时间延长不断升高,直至24周末实验结束。实验结论(1)TNF-?、NF-κB p65、IL-10、TGF-?1参与急性放射性肺炎和放射性肺纤维化发生发展过程,TNF-?、NF-κB p65、IL-10主要在放射性肺损伤急性期起作用。(2)TNF-?相关的NF-κB信号通路在大鼠放射性肺损伤的进展过程中呈动态变化,既参与急性放射性肺炎过程,又参与放射性肺纤维化发生发展过程,但是主要在急性期发挥调控作用。
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