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目的:构建含有人甲状腺过氧化物酶基因(hTPO)的重组腺病毒AdTPO,并将AdTPO和人钠碘转运体基因(hNIS)分别转入胶质瘤细胞系U251中,获得稳定表达hTPO和hNIS基因的细胞系hNIS-AdTPO-U251和hNIS-U251,在(125)I的作用下研究细胞的摄碘能力及摄碘时间。方法:克隆,重组,包装并扩增纯化得到重组腺病毒(AdTPO),并且测定病毒滴度,Western-Blotting检测重组腺病毒的表达。鉴定已构建好的重组质粒(pcDNA3.1-hNIS)。使用脂质体转染法将hNIS基因转染入人胶质瘤细胞系U251中,经过G418抗生素筛选获得稳定表达hNIS的细胞系,为阴性对照组(hNIS-U251);使用重组腺病毒将hTPO基因转导入U251中,使胶质瘤细胞获得hTPO基因,为实验组(AdTPO—hNIS-U251)。未转入hTPO和hNIS的细胞为空白对照组(U251)。进行感染后稳定表达细胞系的体外摄(125)I实验,体外(125)I外流实验,体外(125)I内流实验,过氯酸盐抑制实验,(125)I有机化测定试验,细胞克隆形成实验等。结果:1.hNIS在U251细胞中有瞬时表达,转染了hNIS的U251细胞比未转染hNIS的空白组摄(125)I能力增高约4倍左右(P<0.01)。2.通过重组腺病毒感染已经稳定表达hNIS基因的U251细胞系,将hTPO基因转导至U251细胞后,hNIS联合AdTPO共转染组与空白对照组的摄(125)I能力相比增高约147倍左右(P<0.01),hNIS单独转染组与空白对照组的摄碘能力相比增高约110倍(P<0.01)。3.(125)I内流的动态演变实验证实(125)I在实验组和阴性对照组稳定表达细胞系中均快速聚集,约90-120min时达到稳定阶段。4.(125)I外流的动态演变实验证实阴性对照组中(125)I的有效半衰期为7min,实验组的(125)I外流减慢,其有效半衰期延长至13min。5.NaClO4抑制试验表明加入NaClO4的实验组和阴性对照组的摄(125)I能力明显受到抑制,摄碘能力均降低30倍左右(P<0.001)。6.(125)I有机化测定试验证实hNIS和hTPO共转染U251细胞的有机化程度高于单独hNIS转染U251细胞。7.细胞克隆实验表明经(131)I孵育后实验组比未经(131)I孵育的空白对照组的克滦纬陕视兴档?P<0.01),约降低13倍左右;经(131)I孵育后阴性对照组比未经(131)I孵育的空白对照组的克隆形成率有所降低(P<0.01),约降低10倍左右;而未经(131)I孵育的实验组与阴性对照组及空白对照组的细胞克隆形成率相比未见明显差异。结论:成功获得高滴度的重组腺病毒AdTPO。将hTPO基因和hNIS基因共转染至胶质瘤细胞系U251后,实验组摄碘能力有明显增高,可以部分有机化碘,有效半衰期延长至13min,可以延长放射性碘在细胞中的停留时间。