桑树转景天庚酮糖-1,7-二磷酸酶基因(MSBPase)的研究

来源 :山东农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chenjason886
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
SBPase是卡尔文循环过程中的关键酶,它催化反应处在卡尔文循环中同化与再生的平衡点。此外,SBPase控制着卡尔文循环过程中碳的流量。前人通过对SBPase基因功能的研究发现其具有提高光合性能的作用。转基因植株的叶片内淀粉和可溶性糖含量增加,植物的生长速度和干物质积累量也明显提高,显示了良好的应用前景。桑树基因工程是桑树育种工作的重要组成部分,也是桑蚕行业重要的基础性研究。目前,用于桑树遗传转化的目的基因种类很少,且以抗性基因为主,能够改善桑叶品质、提高桑叶产量的基因国内外尚无报道。有鉴于此,本研究以桑芽为外植体,建立了桑树无菌体系和叶片再生体系,分析比较了不同品种的差异性,并筛选出农杆菌阳性菌株,通过优化影响叶盘遗传转化的各因子,开展了桑树SBPase基因(MSBPase)的遗传转化研究,探讨了稳定高效的遗传转化体系,最终获得了转基因抗性桑芽。主要研究结果如下:1探讨了不同芽位、不同品种、不同季节对启动培养的影响,同时研究不同品种对继代培养的影响,试验结果表明:培养启动培养过程中,桑品种、取材季节、芽位对启动效果的影响均达到显著水平:按启动速度,由快到慢排列顺序为:新桑11号>新桑13号>丰田2号>海宁桑>丰田6号>丰田5号;春季桑芽启动效果优于秋季桑芽;芽位以上部芽最优,其次为中部芽、下部芽:桑树最佳启动培养基为:MS+6-BA 2.00 mg/L +2,4-D 0.10 mg/L。继代培养过程中,桑品种、激素种类及配比对桑苗生长分化影响极显著:供试桑品种继代生长优劣顺序为:新桑11号>新桑13号>丰田2号>丰田6号>丰田5号>海宁桑;激素以6-BA、2,4-D对桑苗生长分化影响最大,其中6-BA对其影响达到极显著水平,NAA不利于桑苗生长分化;桑树最佳分化培养基为MS+6-BA 2.00 mg/L +2,4-D 0.10 mg/L,30 d时桑苗增值系数为4.6,生长高度达4.8 cm。2通过正交试验研究了影响叶片再生的因素,筛选了叶片褐化抑制剂,运用单因素试验确定了桑树生根培养基,试验结果表明:桑品种、叶位、激素配比对叶片愈伤诱导率的影响均达到显著水平:供试桑品种优劣顺序依次为新桑11号>农桑14号>新桑13号>桂桑优12号;叶位为6的叶片愈伤诱导率高于其它叶位;最佳诱导愈伤培养基为MS+6-BA 1.00 mg/L+2,,4-D 0.80 mg/L;新桑11号叶片愈伤诱导率最高,达95%。在分化培养基MS+6-BA 3.00 mg/L+IAA 0.10 mg/L中,新桑11号的不定芽分化率最高达87%,不定芽平均数最高达5.47;附加PVP 2.0g/L时,新桑11号叶片褐化率最低为3%;新桑11号在生根培养基1/2MS+NAA 0.2 mg/L中的生根数最高达5.86。3以新桑11号组培苗为材料,通过单因子试验,确定了遗传转化的最佳侵染浓度、侵染时间、共培养时间、kan筛选浓度、cef抑菌浓度组合,建立了桑树叶盘遗传转化体系。试验表明:菌液侵染浓度以OD600= 0.3最佳;感染桑树叶盘以10 min为宜;共培养2 d最有利于转化;以20 mg/L的Kan进行初筛,30 mg/L的Kan进行二次筛选,并用400 mg/L的Cef抑菌,既可以获得较高的再生芽转化频率,又能得到较好抑菌效果。此转化体系转化效率为10%。4对转化抗性桑芽进行PCR扩增,电泳图谱表明MSBPase基因已经被导入到桑树组织中,桑树转MSBPase基因获得初步成功。
其他文献
在初中物理学习调查中,发现约占40%的学生普遍存在物理成绩上不去的现象,即一是同其他学科相比成绩偏低甚至偏低幅度较大,呈现学科间的显著不平衡;二是本物理学科的多次检测
数学思维对学生以后的学习有很重要的作用,教师作为学生在学习过程中的引领者和参与者.在学生数学思维的培养过程中扮演了很重要的角色.教师要在课堂上对学生的学习进行必要
《语文课程标准》明确提出:“九年义务教育阶段的语文课程,必须面向全体学生,使学生获得基本的语文素养.”同时,《语文课程标准》还提出:“培养学生自主、合作、探究的学习方
初中英语教育对于学生学习来说会是一个比较重要的阶段,它既是学生从小学学习基础的升华同时又是为高中学习打下基础,为以后更好的英语学习有一个良好的开始.
在目前的高中化学课程中,培养学生的实验能力,教师要有着积极的引导作用,学生也要经常主动动脑对活动中的现象进行观察思考,运用多种思维方法,大胆推测对所提问题的可能答案,
在高中语文教学的三维目标中,情感态度与价值观的教育并没有真正落到实处.换言之,虽然教师都知道新课标所强调的“工具性和人文性的统一是语文课程的基本特点”,因为应试教育
山西古交矿区镇城底矿是150万t/a的大型现代化矿井.煤矿安全生产监测系统是原煤炭部太原煤矿设计研究院进行系统总体设计,由太原市自动化研究所进行软件编制、安装及调试.系
学习动机是学生进行学习的原动力,在学生学习的诸多心理因素中,动机处于核心地位.本文分析了学生学习动机的基本类型,提出了激发动机的方法.
一堂音乐课生动与否,是看教与学之间的互动与配合.如果只有教或者只有学就没有默契可言,没有生动可言,更没有没有效率可言,没有效率就是我们教师的失败.怎样才能做到教与学的
“没有教不好的学生,只是没有找到教好学生的方法”.学生是学习是主人,是具体的,不断发展的主体,学生的认知活动是一个能动的过程,是主体依据已有的知识经验能动地构建起关于