海洋无脊椎动物氨基酸类神经递质HPLC测定和免疫组化研究

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氨基酸类神经递质作为神经系统中一类重要的神经递质,在生物进化过程中具有重要的作用。运用邻苯二甲醛(OPA)和9-芴甲氧羰基(FMOC)联合衍生,C18(Hypersil AA-ODS2.1×200mm,5μm)为色谱柱,二极管阵列检测器检测的高效液相法(HPLC),对腔肠动物、扁形动物、纽形动物、软体动物、节肢动物、棘皮动物、脊索动物等海洋无脊椎动物中枢神经系统中氨基酸类神经递质谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、γ-氨基丁酸(GABA)和甘氨酸(Gly)的含量进行测定,结果表明:黄海葵神经系统中Asp、Glu、Gly、GABA含量分别为0.24mg/g、0.48mg/g、0.24mg/g、5.06mg/g;纽虫神经系统Asp、Glu、Gly、GABA含量分别为0.08mg/g、0.06mg/g、0.07mg/g、0.91mg/g;锈凹螺神经系统Asp、Glu、Gly、GABA含量分别为1mg/g、0.98mg/g、0.19mg/g、6.68mg/g;刺参幼参神经系统Asp、Glu、Gly、GABA含量分别为0.22mg/g、0.91mg/g、0.05mg/g、0.2mg/g。可见神经系统中神经递质Glu、Asp和GABA的含量随着无脊椎动物神经系统的进化整体上呈现上升的增长趋势,仅在纽形动物以及棘皮动物中出现明显地降低;而Gly的含量在无脊椎动物神经系统进化的过程中基本未发生明显变化,这可能与它们不同的生活环境和习性有关。因此推测,这几种氨基酸类神经递质Glu、Asp、Gly、GABA在海洋无脊椎动物神经系统中承担不同的作用,参与不同功能的调节。 本研究运用免疫组织化学SABC染色方法(即采用生物素标记的第二抗体与结合有辣根过氧化物酶或者碱性磷酸酶的链霉亲和素连接来测定细胞及组织中抗原的方法),对黄海葵、三角涡虫、纽虫、嫁()、脉红螺、扁玉螺、中国蛤蜊等海洋无脊椎动物中枢神经系统中氨基酸类神经递质Glu和GABA进行了免疫组织化学的定位研究。结果发现:神经递质Glu、GABA在研究的几种海洋无脊椎动物中枢神经系统中都检测到有阳性反应,分布范围较广,在外周神经系统中也有少量分布,说明Glu、GABA在海洋无脊椎动物的进化过程中一直被保留下来,并且在研究的几种动物体的许多行为活动中具有重要的意义,对不同的功能担负着重要的调节作用。探讨了一氧化氮(Nitric oxide,NO)对氨基酸类神经递质的影响,运用邻苯二甲醛(OPA)和9-芴甲氧羰基(FMOC)联合衍生,C18(Hypersil AA-ODS2.1×200mm,5μm)为色谱柱,二极管阵列检测器检测的高效液相法(HPLC),测定扁玉螺在分别用NO两种抑制剂L-NAME和L-NMMA处理后,中枢神经系统中氨基酸类神经递质含量的变化。结果显示:扁玉螺在分别用0.2mmol/L浓度的NO抑制剂L-NAME、L-NMMA处理2h时,氨基酸类神经递质Glu、Asp、GABA的含量与对照组比有明显的降低;处理4h后Glu、Asp、GABA含量开始增加。说明NO含量的增加或减少影响着扁玉螺中枢神经系统中氨基酸类神经递质的释放。
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