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目的:研究染料木素对K562细胞体外增殖的影响及K562细胞内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性和一氧化氮(NO)浓度的变化,探讨染料木素治疗慢性粒细胞白血病的作用机理。
方法:体外培养K562细胞,应用台盼蓝染色法检测细胞状态,并绘制细胞生长曲线。进入增殖期的K562细胞,经5μg/ml、10μg/ml和20μg/ml的染料木素分别处理24h,72h和120h后,应用MTT法和3H-TdR掺入法检测细胞增殖状态。应用Giemsa染色法和流式细胞术分析观察应用染料木素24h和120h后K562细胞凋亡情况。应用紫外光分光光度法检测料木素处理24h,72h和120h后K562细胞内iNOS活性和NO含量的变化。所得数据进行统计学分析。
结果:染料木素能够抑制K562细胞增殖,最高的抑制率可达到33.2%~68.9%。染料木素可诱导K562细胞凋亡,染色质边集、浓缩,可见“沸腾”现象和凋亡小体形成。流式细胞仪检测K562细胞的细胞周期阻滞在G0/G1期,并可见亚二倍体峰形成,本实验检测到的细胞凋亡率可达到15.38~26.42%。染料木素可引起K562细胞内iNOS活性升高,为正常水平的2.067~6.693倍,而细胞内NO的含量为正常水平的54.513~89.520倍。
结论:染料木素可诱导K562细胞发生凋亡,且通过这种方式抑制其增殖。并且在诱导K562细胞凋亡同时激活了iNOS,导致细胞内NO浓度增加。我们推测染料木素诱导细胞凋亡可能与启动细胞内的NO途径有关,为探讨染料木素治疗慢性粒细胞白血病提供了一定的理论依据。