论文部分内容阅读
研究背景及目的：自1983年Marshall和Warren成功分离并培养了幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)以来,关于其与许多慢性胃疾病、癌前病变以及胃癌发生的相关性及其机制问题成为国内外研究的热点。Hp既能导致胃上皮细胞的凋亡,同时刺激其代偿性增殖,因此由Hp感染而导致的胃上皮细胞更新率(凋亡或增殖)的改变可能是胃癌发生的重要机制,然而Hp对胃上皮细胞以及不同胃癌细胞增殖凋亡情况的影响及具体机制尚不十分清楚。本研究旨在通过构建胃上皮细胞GES-1、人胃腺癌细胞株3GC-7901、人低分化胃腺癌细胞系MGC-803、人胃癌细胞株BGC-823Hp体外感染模型,观察HpI型菌株(CagA+, VacA+)对上述细胞形态、增殖、以及细胞凋亡的影响,并探讨其可能机制,研究Hp感染在胃癌发生、发展中的作用,为胃癌的临床诊断和防治提供理论依据。方法：将胃上皮细胞GES-1、人胃腺癌细胞株SGC-7901、人低分化胃腺癌细胞系MGC-803、人胃癌细胞株BGC-823分别与不同MOI(multiplicity of infection)的Hp I型菌株(CagA+, VacA+)培养24h、48h。进行以下实验分析：(1)倒置显微镜下观察上述四种细胞在不同MOI、不同培养时间的细胞形态学变化；(2)MTT法检测四种细胞在不同MOI、不同培养时间的细胞生长情况,分析Hp对四种细胞增殖情况的影响；(3)流式细胞仪分析上述四种细胞细胞凋亡指数(AI)、增殖指数(PI)、细胞周期；(4) Western-blot方法检测凋亡相关蛋白Caspase-3, Caspase-9及增殖相关蛋白P53, P21、E2F-1表达情况。结果：(1)倒置显微镜下观察四种细胞与Hp共同培育后细胞正常形态发生改变,且随着细菌数目增加,细胞形态失常更加明显。(2)MTT细胞增殖活性检测显示四种细胞株经Hp处理后,细胞增殖活性受到不同程度抑制,其中正常胃上皮细胞株GES-1抑制明显,且随时间增加、细菌数目增多抑制效应明显,而SGC-7901、MGC-803、BGC-823三种细胞系抑制率随Hp数目、培育时间变化呈轻微改变。(3)流式细胞学(FCM)检测在Hp处理后四种细胞系凋亡指数升高,增殖指数升高,呈不同比例的S期细胞增多,G1期细胞减少现象。(4) Western-blot检测显示经Hp处理后,四种细胞系Caspase-3, Caspase-9表达量不同程度降低,E2F-1蛋白表达水平较对照组不同程度升高,GES-1细胞株P53、P21表达水平较对照组表达水平降低,SGC-7901、MGC-803、BGC-823三组细胞株P53、P21表达水平均呈低表达,未见明显差异性变化。结论：Hp能够影响正常胃上皮细胞及胃癌细胞形态学异常改变,对正常胃上皮细胞及不同类型的胃癌细胞在细胞增殖和细胞凋亡上存在不同程度的影响,造成细胞增殖及凋亡平衡紊乱。