甘肃河西走廊地区幽门螺杆菌适应性进化特征的研究

来源 :兰州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiaomantou_2001_78
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据统计,世界上约有一半以上的人口感染有幽门螺杆菌,目前已证实它与慢性萎缩性胃炎、消化性溃疡和胃肿瘤(如胃癌和黏膜相关淋巴组织淋巴瘤)等疾病有关。中国甘肃河西走廊地区是我国胃癌高发区,幽门螺杆菌的感染率也高于全国平均水平,但是该地区幽门螺杆菌的起源及种群结构尚不清楚。目的:了解甘肃河西走廊地区幽门螺杆菌(H.pylori)基因组特征及种群结构,阐释该地区H.pylori菌群的进化起源,进而探讨该地区胃癌高发的成因是否与该地区的H.pylori菌群特征有关。方法:1.收集甘肃河西走廊地区H.pylori感染的胃黏膜标本254例,在微需氧环境中成功分离培养出临床菌99株,并鉴定保存于-80℃冰箱。2.复苏保存的H.pylori菌株,传代培养后采用Qiagen54104试剂盒进行细菌基因组DNA的提取。根据文献筛选出H.pylori的7个管家基因AtpA、Efp、MutY、Ppa、TrpC、Urel、YphC进行基因测序。3.将所得到的7个管家基因核酸扩增片段DNA序列进行电泳检测后,利用ABI PRISM 310 DNA sequencer对扩增产物测序并拼接,然后进行MLST分析,获得菌株所对应的等位基因谱(allelic profile)和序列型(sequence type,ST),并与国际菌株的资料进行比较,从而获得这些菌株的致病相关性。4.使用MEGA7软件构建系统进化树,并进行分析甘肃河西走廊地区临床菌株的结构特点。结果:1.对99株甘肃河西走廊地区临床菌进行MLST分析,得到了99个序列型,并且这99个序列型都是H.pylori MLST数据库中未曾报道过的,证明均是新发现的菌株。这99株临床分离菌株大致分为3个簇,其中大部分武威、酒泉菌株聚类相对集中,分别聚为2簇,而金昌和古浪地区菌株聚类相对分散。通过比较不同疾病之间的聚类分析关系,没有发现明确的聚集现象。2.中国已分离的菌株和本研究的甘肃河西走廊地区菌株进行对比分析,结果发现华北地区和河西地区菌株出现聚类情况,可能该地区存在克隆群之外,其他均为散在分布的单个的点。另将整体中国菌株(包括本研究的河西菌株)与全球不同分布菌株对比,发现中国菌株大部分和hpEastAsia种群聚在一起,而其他菌株仅仅表现为散在的小聚集现象。结论:1.河西走廊地区幽门螺杆菌不同于目前已发现的菌株,其不同地区具有其独特的等位基因,有一定的地域相关性,但疾病相关性不明显。2.中国菌株大多聚类于hpEastAsia种群或者亚类,华北地区和河西地区菌株出现聚类情况,不同地区来源的H.pylori菌株的基因型大多为独特型,且在一定地域的小范围内,菌株显示出一定的聚类性,说明可能就是克隆群的存在(Clonal Groups)。
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