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目的:缺血性脑血管病是常见病、多发病,病死率和致残率高。脑梗死后继发性脑损伤的病理生理机制复杂,其中过度炎症免疫反应存在于脑梗死后坏死及缺血区域,导致炎症损伤,此已达成共识,因此,减轻炎症损伤成为治疗急性脑梗死的主要途径之一。然而,抗炎治疗在脑梗死的临床研究中并没有取得预期效果。寻找炎症级联反应上游的始动因素并加以抑制可能为脑梗死的治疗带来新的突破,Toll样受体(Toll-like receptors, TLRs)的发现促进了人们对炎症始动机制的理解,其中TLR2的结构及其参与炎症反应、调解免疫应答等方面研究的较为清楚。TLR2不但在病原微生物性炎症损伤中起重要作用,也在脑梗死、心肌梗死等非病原微生物性炎症损伤中发挥关键作用,但TLR2在脑组织中的细胞定位一直存在争议。氧化苦参碱(Oxymatrine, OMT)是从豆科槐属植物苦参(Sophora flavescens Ait)中提取的生物碱,具有四环喹嗪啶类结构。OMT具有抗炎、抗氧化、抗病毒及调节免疫等多方面药理作用,但其作用机制尚不完全明确,近几年对于OMT的研究很多,多集中在抗肿瘤及抗心肌梗死等方面,关于OMT在脑梗死中作用的研究较少。本实验以线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞(middlecerebral artery occlusion, MCAO)模型,应用RT-PCR和免疫组织化学技术测定脑梗死后TLR2的动态表达规律;应用激光扫描共聚焦技术研究TLR2在大鼠脑梗死组织中的细胞定位;应用OMT作为干预药物,研究OMT对脑梗死后脑水肿、脑梗死体积及TLR2表达的影响,旨在探讨OMT在脑梗死中的脑保护作用及其作用机制。方法:采用成年健康雄性Sprague-Dawley大鼠,随机分为4组:假手术组、大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)组、大剂量OMT治疗组(120 mg/kg,HOMT)和小剂量OMT治疗组(60 mg/kg,LOMT)。根据不同时间点每组分为6 h、24 h、48 h、72 h四个亚组。应用Longa等的线栓法建立大鼠MCAO模型。将OMT以生理盐水制成浓度为40mg/ml及80mg/ml两种试剂,HOMT组、LOMT组、MCAO组分别给予80mg/ml OMT溶液120mg/kg、40mg/ml OMT溶液60mg/kg及生理盐水1.5ml/kg,各组均为腹腔注射给药,手术完毕后即刻给药一次,之后每天给药一次,直至相应时间点断头处死动物。假手术组除不插线栓外其余操作同MCAO组。应用RT-PCR测定TLR2 mRNA的动态表达,免疫组织化学检测脑组织TLR2免疫阳性细胞数,TTC染色测定脑梗死体积,干湿重法检测脑组织含水量,Confocal技术观察TLR2的细胞定位。结果:1脑组织含水量测定用干湿重法测得的脑组织含水量结果显示:MCAO组、LOMT组和HOMT组大鼠病变侧脑组织含水量均在术后6 h开始升高,48 h达高峰,72 h开始下降。Sham组大鼠脑组织含水量无明显升高。与MCAO组相比,HOMT组的脑组织含水量在24,48和72 h明显下降(P<0.01)。LOMT组除48 h脑组织含水量有所下降外(P<0.05),术后其余时间点的脑组织含水量与MCAO组均无统计学差异。2脑梗死体积测定:TTC染色显示:sham组脑组织均匀红染无梗死灶,MCAO组可见大面积白色梗死灶,多位于右侧基底节、顶叶和颞叶皮质。脑梗死体积测定显示:LOMT组脑梗死体积低于MCAO组,但差异无统计学意义(P>0.05);HOMT组脑梗死体积低于MCAO组及LOMT组,差异有统计学意义(P<0.05);3脑组织TLR2免疫阳性细胞数及mRNA的动态表达脑组织TLR2免疫阳性细胞结果显示:MCAO组、LOMT组和HOMT组大鼠病变侧TLR2免疫阳性细胞数均高于sham组,差异有统计学意义(各亚组均P<0.05);MCAO组6 h阳性细胞开始增加,主要位于脑缺血区皮层,48 h阳性细胞数达高峰,主要位于缺血半暗带区皮层,72 h开始下降;脑组织TLR2 mRNA表达结果显示:MCAO组、LOMT组和HOMT组大鼠病变侧TLR2 mRNA表达均高于假手术组,差异有统计学意义(各亚组均P<0.05);与sham组相比,MCAO后6 h TLR2 mRNA表达即明显增高,至72 h时达高峰。4 TLR2的细胞定位Confocal结果显示,脑梗死后TLR2阳性细胞较假手术组明显增多;梗死后6 h,TLR2主要定位于NeuN阳性神经元,几乎不表达于Iba-1阳性小胶质细胞及GFAP阳性星形胶质细胞;而梗死后72 h,TLR2主要定位于NeuN阳性神经元及Iba-1阳性小胶质细胞,几乎不表达于GFAP阳性星形胶质细胞。5 OMT对脑梗死组织TLR2阳性细胞及mRNA的影响TLR2阳性细胞:LOMT各亚组TLR2阳性细胞数较MCAO组减少,除6 h亚组外,其余亚组差异有统计学意义(P<0.05);各亚组阳性细胞数较MCAO组减少,除6 h亚组外,其余亚组差异有统计学意义(P<0.05);HOMT 72 h亚组低于LOMT组,差异有统计学意义(P<0.05),6 h、24 h、48 h亚组与LOMT组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。TLR2 mRNA表达:LOMT 6 h、24 h亚组与MCAO组比较,差异无统计学意义(P>0.05), 48 h、72 h亚组均低于MCAO组,差异有统计学意义(P<0.05);HOMT各亚组与MCAO组比较,TLR2 mRNA表达降低,除6 h亚组外,其余亚组差异有统计学意义(P<0.05);HOMT 24 h、72 h亚组低于LOMT组,差异有统计学意义(P<0.05),6 h、48 h亚组与LOMT组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:脑梗死后TLR2表达升高,在6 h时开始上升,48或72 h时达高峰。脑梗死早期,TLR2上调可能与急性缺血性神经元损伤有关;脑梗死晚期,TLR2可能参与了脑梗死后的炎症反应,加剧梗死后继发性脑损伤。OMT可以减轻梗死后脑水肿、减小梗死体积,其神经保护作用可能与下调TLR2表达有关。