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中医认为,恶性肿瘤发生的主要机理之一为热毒蕴结,治疗上主要采用清热解毒大法,药理学研究及长期的临床实践均表明很多清热解毒中药具有抗肿瘤的作用,有些已被临床采纳成为治疗肿瘤的主要组方成分。本课题组的前期研究发现,热休克反应所表现的症状与中医的热证症状相似,且与热休克蛋白(heat shock protein,HSP)的表达相关,认为热休克蛋白70(heat shock protein70,HSP70)在恶性肿瘤细胞中有较高表达,与中医热证可能相关,具有证的相关性。本课题的前期实验发现经清热解毒中药处理后的小鼠腹水肝癌H22细胞胞膜HSP70表达较对照组高。 近年来对的HSP70的研究非常广泛,由于其在肿瘤特别是在恶性肿瘤细胞中有较高表达,故其在肿瘤方面的研究较多,尤其在肿瘤免疫方面的研究较为深入。目前主要认为HSP70可以携带多种肿瘤抗原肽被称为热休克蛋白70多肽复合物(heat shockprotein70 complexes,HSP70-PC),HSP70主要起“分子伴侣”的作用,将肿瘤多肽分子直接或间接呈递给机体T淋巴细胞引起机体对肿瘤细胞的特异性免疫反应。 本研究主要承接本课题前期实验,目的:探讨经清热解毒中药处理后的胞膜有较高HSP70表达的腹水肝癌H22细胞是否可诱导机体对小鼠移植瘤的主动免疫作用及其免疫学机制。方法:1、选取清热解毒代表中药冬凌草、半枝莲作为研究对象,并以益气健脾中药黄芪作对照。本实验先用培养的肝癌H22细胞接种受试动物致腹水瘤,采用腹水涂片,瑞氏-姬姆萨染色法观察各组腹水中肿瘤细胞的形态学变化,采用SP法免疫组化双染法检测各组活体腹水中T淋巴细胞CD4~+、CD8~+的表达;2、取经冬凌草、半枝莲、黄芪治疗后的腹水肝癌H22细胞分为封闭与未封闭组,封闭组内加入适量的HSP70单克隆抗体以阻断HSP70的表达,未封闭组不加入抗体,然后以相同的量免疫小鼠右腋皮下二次,同时设1640缺省对照组即以1640基础营养液注射入小鼠右腋皮下二次,第二次免疫一周后用体外培养的活体肝癌H22细胞攻击小鼠左腋皮下致成实体移植瘤,采用直接荧光标记法,流式细胞仪分析技术对小鼠外周血的T淋巴细胞亚群进行分析,取荷瘤鼠的移植瘤、脾及胸腺做病理切片光镜下观察病理改变,称取瘤重进行统计学分析。结果:1、腹水涂片显示较对照组比较清热解毒中药治疗组及热休克处理组腹水中有大量淋巴细胞,腹水中的癌细胞变形坏死较多,可见到凋亡细胞,黄芪治疗组的腹水中虽有较多淋巴细胞但癌细胞胞膜完整,形状规则等大圆形,未见明显变形;2、肝癌H22细胞腹水的免疫组化显示清热解毒中药组的腹水T淋巴细胞亚群中的CD4~+、CD8~+表达较高;3、光镜下实体瘤小鼠的组织切片显示:清热解毒中药的未封闭组较相应封闭组、1640缺省对照组和黄芪组的肿瘤细胞坏死程度大,面积广,脾和胸腺组织的免疫状况亦增强;4、实体瘤小鼠外周血T淋巴细胞亚群中CD4~+表达较其他组大,但未见显著性差异(P>0.05)。结论:1 清热解毒中药可诱导HSP70的高表达,确可提高机体对恶性肿瘤细胞的免疫杀伤作用;2 清热