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昆虫发育包含胚胎发育和胚后发育阶段。昆虫的胚胎发育时期或称为卵期面临外界环境严峻的考验,例如机械压力、温度湿度变化、病原体侵扰等。卵壳为胚胎构筑了坚实的物理屏障,提供了合适的环境,为胚胎正常发育提供重要保障。褐飞虱(Nilaparvata lugens)是一种重要的农业害虫,专食水稻为害,严重时能够使粮食大幅度减产,造成重大经济损失。本研究从褐飞虱转录组和基因组数据筛选到两个在卵期特异高表达的未知基因NULGE019747.1、
NULGE012772.1,通过时间表达模式分析、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、RNA干扰(RNAi),透射电镜观察(TEM),转录组分析等技术手段,对褐飞虱这两个未知基因进行了研究,主要结果如下:
1.NULGE019747.1的功能分析。通过序列分析,NULGE019747.1的ORF为1722bp,编码一个573个氨基酸,预计分子量为61.04kDa的蛋白,有部分富含亮氨酸的重复区域。信号肽预测结果显示NULGE019747.1编码的氨基酸序列在N-端有一个20个氨基酸的信号肽区域,表明该蛋白是一个分泌蛋白。该基因在卵期24小时高水平表达,在若虫、成虫期均不表达。用双链RNA(dsRNA)干扰该基因后,卵孵化率几乎为0。TEM观察表明,干扰了该基因后,内卵壳质地不均一,浆膜表皮层变得很薄,甚至不形成。转录组分析表明,在干扰了NULGE019747.1后,涉及跨膜转运体活动、几丁质结合、几丁质代谢过程、基于几丁质的角质层发育、几丁质脱乙酰酶的活动等基因表达异常。因此,我们推测该基因影响浆膜表皮的发育,在表皮的新陈代谢中起着重要作用。
2.NULGE012772.1的功能分析。通过序列分析,NULGE012772.1的ORF为702bp,编码一个233个氨基酸,预计分子量为25.40kDa的蛋白。该基因编码的蛋白在N-端有一个21个氨基酸的信号肽区域,表明它也是一个分泌蛋白。表达谱分析表明NULGE012772.1在卵期24小时高水平表达。经RNAi干扰后,卵孵化率为24.38%,与对照组相比,孵化率显著性降低。TEM观察表明,干扰了该基因后,内外卵壳边界不清晰,浆膜表皮结构疏松出现孔洞。转录组分析表明,涉及脂质代谢过程、一元羧酸代谢过程、脂质运输、脂肪酸代谢过程等基因表达差异显著,这些与脂质代谢相关的基因异常活动,很可能影响了浆膜表皮富含脂类的疏水层的组建。
NULGE012772.1,通过时间表达模式分析、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、RNA干扰(RNAi),透射电镜观察(TEM),转录组分析等技术手段,对褐飞虱这两个未知基因进行了研究,主要结果如下:
1.NULGE019747.1的功能分析。通过序列分析,NULGE019747.1的ORF为1722bp,编码一个573个氨基酸,预计分子量为61.04kDa的蛋白,有部分富含亮氨酸的重复区域。信号肽预测结果显示NULGE019747.1编码的氨基酸序列在N-端有一个20个氨基酸的信号肽区域,表明该蛋白是一个分泌蛋白。该基因在卵期24小时高水平表达,在若虫、成虫期均不表达。用双链RNA(dsRNA)干扰该基因后,卵孵化率几乎为0。TEM观察表明,干扰了该基因后,内卵壳质地不均一,浆膜表皮层变得很薄,甚至不形成。转录组分析表明,在干扰了NULGE019747.1后,涉及跨膜转运体活动、几丁质结合、几丁质代谢过程、基于几丁质的角质层发育、几丁质脱乙酰酶的活动等基因表达异常。因此,我们推测该基因影响浆膜表皮的发育,在表皮的新陈代谢中起着重要作用。
2.NULGE012772.1的功能分析。通过序列分析,NULGE012772.1的ORF为702bp,编码一个233个氨基酸,预计分子量为25.40kDa的蛋白。该基因编码的蛋白在N-端有一个21个氨基酸的信号肽区域,表明它也是一个分泌蛋白。表达谱分析表明NULGE012772.1在卵期24小时高水平表达。经RNAi干扰后,卵孵化率为24.38%,与对照组相比,孵化率显著性降低。TEM观察表明,干扰了该基因后,内外卵壳边界不清晰,浆膜表皮结构疏松出现孔洞。转录组分析表明,涉及脂质代谢过程、一元羧酸代谢过程、脂质运输、脂肪酸代谢过程等基因表达差异显著,这些与脂质代谢相关的基因异常活动,很可能影响了浆膜表皮富含脂类的疏水层的组建。