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目的:查阅相关文献,从中医角度认识心的结构和功能、神的分类和功能以及心与神之间的关系,从病因、病机、治法、方药等角度理清中医对失眠的认识,探讨心神与睡眠的关系,以及养心安神法治疗失眠的理论基础。构建失眠大鼠模型,观察养心安神法对失眠大鼠的作用及脑部相关神经因子及其受体的影响。通过理论探讨和实验研究两部分为养心安神法在失眠中的应用提供理论基础和实验依据。方法:1.理论探讨:查阅资料,整理文献,理清中医对心以及神的系统性认识,把心、神、睡眠三者之间的关系进行归纳总结,明晰心神对睡眠的影响,从中医的角度探讨养心安神法的作用,并整理相关的治则治法、处方用药。2.实验研究:选取SPF级SD雄性大鼠50只,运用复合造模法(水环境法+腹腔注射咖啡因、环磷酰胺)构建失眠大鼠模型,观察该条件下各个指标的变化情况。每一组大鼠分别灌胃给药14d,借助Morris水迷宫法检测其学习记忆能力,应用自发活动实验视频分析系统观察各组的自主活动;下丘脑的超微病理结构借助透射电镜,具体观察SCN形态、细胞器等;通过免疫组化比较各组之间神经因子在海马、下丘脑的阳性表达;ELISA试剂盒对大鼠下丘脑、海马中NGF、BDNF和VIP的表达进行检测;Real Time-PCR法检测其下丘脑、海马NGF、BDNF、VIP受体表达的影响。结果:1.一般状态:造模前(T=0,T=7),各组大鼠精神活跃,活动良好,睡眠规律,皮毛光泽。造模开始阶段,部分大鼠出现过度兴奋,毛发晦暗枯藁,爪甲白色或淡黄色;到造模后期时(T=21,T=28),造模大鼠兴奋性降低,精神萎靡,多数大鼠双目无神,口唇、爪甲颜色发白,毛发杂乱,反应迟钝。空白组自始至终状态良好,活动灵活,睡眠、摄食如常。体重称量:造模期间空白组体重增长明显,其余组均有一定的增长。未造模时以及适应性喂养1周(T=0,T=7),造模组与空白组对照无差异性(P>0.05),造模7d后(T>7),空、模两组体重差异凸显(P<0.01),造模后期(T=21,T=28),各组体重均低于空白组,有显著差异(P<0.01),此时造模各组体重增长放缓,趋于平稳。外周血红蛋白浓度:造模的前7天,各组比较显示Hb浓度无明显差异(P>0.05),从造模第7天后检测发现各造模组较空白组血红蛋白浓度降低(P<0.01),在第21d、第28d时中药组和西药组与模型组比较,外周血红蛋白浓度有所升高,但仍明显低于空白组(P<0.05)。2.Morris水迷宫:在平台潜伏期、游泳总路程的对比上,模型组较空白组明显増长(P<0.01);经过治疗,与模型组比较,中药组和西药组两个指标改善,仍低于空白组,组间比较有统计意义(P<0.01)。模型组与空白组比较,大鼠跨越圆台次数减少(P<0.01),目标区域运动时间缩减(P<0.01),第1次抵达平台时间延长(P<0.01);治疗后中药各组和西药组对比模型组越过原平台次数和目标区域时间均增加(P<0.01),第1次穿越平台时间缩短(P<0.01)。整个过程中,模型组极少穿越平台,中药组和西药组少数能穿过平台。自主活动实验:同空白组比较,模型组大鼠活动次数和活动路程高于空白组,活动时间延长(P<0.01),给药后,西药组和天王补心丹高、低剂量组与模型组比较,大鼠活动次数、活动路程和活动时间都有所下降(P<0.01,P<0.05)。3.超微电镜:SCN的神经元主要是卵圆形。细胞核不规则。核质比较大,胞浆较少。空白组线粒体嵴、膜基本正常,脂褐素(Lipo)大小适中,高尔基体囊池扁平,排列一般整齐。模型组SCN神经元线粒体较空白组体积明显增大,伴有空泡样改变,部分嵴断裂消失,Lipo数量增多,体积增大,染色加深,高尔基体囊池排列紊乱,有广泛肿胀及空泡化。给药后,中药高、低剂量组和阳性对照组线粒体损伤减轻,Lipo体积稍增大,染色较深,部分囊池排列紊乱。免疫组化:BDNF的阳性表达集中区域包围核膜,颜色呈棕褐或棕黄色,染色匀称,环形表达。海马部位是阳性细胞广泛分布区域,如CA3、CA1、齿状回DG等;NGF的分布只要集中在的胞体、胞浆周围,颜色棕褐色,神经元排列一致,以海马CA3,CA1,DG区居多。比较各组累计光密度值(IOD),模型组IOD较空白组下降;中药高、低剂量组和阳性对照组IOD较模型组升高(P<0.05,P<0.01),药物组之间比较差异不明显(P>0.05)。4.ELISA检测结果:下丘脑与海马中NGF、BDNF、VIP含量的检测结果较为一致。与空白组比较,模型组NGF、BDNF、VIP的含量显著下降(P<0.01)。中药组、西药组在治疗后检测NGF、BDNF、VIP的浓度,发现对比模型上升,仍低于空白(P<0.01,P<0.05),VIP检测里低剂量与模型相比无差异(P>0.05),阳性对照组和天王补心丹高剂量组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。5.Real Time-PCR检测结果:下丘脑检测:对比空白组,其余各组下丘脑NGF、BDNF、VIP受体mRNA表达下调显著;经过治疗后,天王补心丹高、低组和阳性药物组NGF、BDNF、VIP受体mRNA表达较模型组有不同程度的上调。海马检测:天王补心丹低、高剂量组与阳性对照组NGF、BDNF、VIP受体mRNA表达较空白组有所下调;同时,对比模型组,天王补心丹低、高剂量组和阳性对照组NGF、BDNF、VIP受体mRNA表达存在不同水平的上调。结论:1、心是生命机能的根本,是五脏六腑之大主,神是生命机能的主宰,是主导睡眠的基础;心神在睡眠的调节中起重要作用,同时还需要五脏神、营卫气血等正常功能作为保证。养心安神法是调节睡眠的重要方法。2、多平台水环境法与咖啡因、环磷酰胺腹腔注射的联合造模方法具有可复制性。3、选取的养心安神代表方天王补心丹方具有镇静催眠作用,能够改善失眠模型大鼠的睡眠状态。4、养心安神法在改善模型大鼠睡眠质量的同时,还对学习记忆具有明显改善作用,机制可能与调控脑中NGF、BDNF、VIP的表达有关。