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[目的]脂肪酸可分为饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸三大类。大量研究证实,食物中脂肪酸的种类、比例与人体健康密切相关。红细胞膜脂肪酸种类的组成,特别是ω-6和ω-3多不饱和脂肪酸之间的比例,可以有效反映人体脂肪酸饮食的变化,有望成为脂类相关疾病(如心血管疾病,乳腺癌等)的生物指标之一。本课题从脂肪酸,特别是多不饱和脂肪酸对人体的营养价值出发,拟建立生物样品脂肪酸检测系统,讨论牛奶脂肪酸的价值;从红细胞膜脂肪酸的角度探讨冠心病、乳腺癌的致病机理,为人们脂肪酸饮食提供科学指导。
[方法](1)脂肪酸抽提,甲酯化一步法;
(2)气相色谱-质谱联用检测技术;
(3)脂肪酸检测的方法学评价:仪器重现性实验,对照实验,抽提方法重复性实验,回收实验等;
(4)气相色谱-质谱定性定量方法检测牛奶、红细胞膜脂肪酸甲酯;
(5)全自动生化分析仪检测血清脂蛋白。
[结果](1)气相色谱-质谱可以在24分钟内把满足实验要求的脂肪酸甲酯分离并鉴定出来;对照实验结果显示C17:0作为定量分析的内标物;DB-WAX色谱柱对大部分脂肪酸峰的有效塔板数为104~106;分离度显示仪器对相邻色谱峰的分辨率比较好;牛奶样品重现性试验显示脂肪酸变异系数为2.31%~9.81%,仪器重现性变异系数为1.15%~5.68%,回收率为84.2%~103.4%。
(2)国产全脂和酸牛奶都含有相同种类的16种脂肪酸,低脂牛奶含13种;三种国产牛奶中,酸牛奶总脂肪酸的含量最低。不同类型牛奶脂肪酸的比例不均衡:饱和脂肪酸的含量最高,约占70%;多不饱和脂肪酸的含量最低,仅为3%~7%;除了低脂牛奶外,全脂牛奶和酸牛奶的ω-6/ω-3脂肪酸比率为2~4。
(3)湖光牛奶各类脂肪酸的比例不均衡,平均饱和脂肪酸∶单不饱和脂肪酸∶多不饱和脂肪酸为11.80∶4.38∶1,饱和脂肪酸的含量最高,达到69%;多不饱和脂肪酸的含量最低,仅为4%~7%;平均ω-6/ω-3脂肪酸比率为2.30。
(4)红细胞膜脂肪酸改良实验中,简单方法所测的饱和脂肪酸(t=-3.212,P=0.033<0.05)和多不饱和脂肪酸(t=-6.472,P=0.003<0.01)的绝对含量明显比传统方法的要高,单不饱和脂肪酸(t=-2.445,P=0.071>0.05)的绝对含量没有差别;两种方法所得的脂肪酸相对含量没有显著性差别,重现性试验各脂肪酸CV均小于20%;简单方法所测得脂肪酸回收率为87.8%~110.7%。
(5)乳腺癌病人红细胞膜平均的ω-6/ω-3脂肪酸比值为3.32∶1,与正常比值1∶1进行比较,差异有非常显著性(t=10.371,P<0.01);平均的饱和脂肪酸∶单不饱和脂肪酸∶多不饱和脂肪酸为3.73∶1∶2.09。
(6)冠心病人红细胞膜平均的ω-6/ω-3脂肪酸比值为3.92∶1,与正常比值1∶1进行WILCOXON配对法检验,差异有非常显著性(t=465,P<0.01);ω-6/ω-3脂肪酸比率分别与血清中甘油三脂和极低密度脂蛋白成线性相关,Spearman相关系数分别为0.42924和0.42577;回归方程分别为Y=2.94607+0.82021X和Y=2.96537+1.79267X。平均的SFA∶MUFA∶PUFA为3.35∶1∶2.16,特别是饱和脂肪酸的比例占了总脂肪酸含量的50%。
[结论]本研究建立的脂肪酸检测系统高效易行,准确可靠,节省时间,适合大标本量的检测。有必要优化牛奶脂肪酸的组分以满足人体的营养需求。乳腺癌,冠心病人红细胞膜中ω-6/ω-3脂肪酸比值与该疾病的发生发展密切相关。有必要合理调节乳腺癌和冠心病病人饮食中ω-6/ω-3多不饱和脂肪酸的比率。