血浆miRNA-216a/b在食管鳞状细胞癌中的表达水平及诊断价值分析

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背景与目的食管癌(Esophageal cancer,EC)是世界上最常见的恶性肿瘤之一,我国是EC高发区。EC主要分为食管鳞状细胞癌(Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)和食管腺癌(Esophageal adenocarcinoma,EAC)两种主要病理类型,ESCC是EC的主要类型,且主要发生于亚洲和非洲地区,而EAC则主要发生于西方国家。EC患者预后极差,总体5年生存率仅为15%-25%,而早期患者可提高至90%以上。Micro RNAs(mi RNAs)是一类长度为17-25个核苷酸的单链非编码RNAs,通过与靶m RNAs的3’-非翻译区(3’-untranslated region,3’-UTR)以碱基配对的方式结合,抑制靶m RNAs翻译或促进其降解,从而在转录后水平调节基因表达。研究表明,mi RNAs可以调节人类约30%-60%的基因表达,在细胞的增殖、分化、凋亡、细胞周期、侵袭和转移等病理生理进程中发挥重要的调节作用。mi RNAs被证实可以参与许多类型的癌症的发生和发展。循环mi RNAs(circulating mi RNAs)是指存在于外周血中的mi RNAs,根据标本类型的不同,可分为血浆和血清mi RNAs。越来越多的研究证实,循环mi RNAs在多种肿瘤患者中异常表达,并在肿瘤的诊断、预后评估和疗效监测等方面展现出巨大的临床应用价值。循环mi RNAs被认为起源于相应肿瘤组织中,其表达水平与肿瘤组织呈现一定的相关性。且循环mi RNAs能够抵抗RNA酶消化、强酸强碱环境和温度变化等条件,可稳定存在于外周血当中,因此循环mi RNAs被认为是比较理想的肿瘤标志物。Mi RNA-216a/b是mi RNA-216家族的两个成员。近几年的研究表明mi RNA-216a/b在诸如非小细胞肺癌、结肠癌、肝癌、口腔鳞状细胞癌和鼻咽癌等多种肿瘤中异常表达并参与肿瘤的发生发展,并且血浆mi RNA-216a/b在诊断急性胰腺炎、胰腺癌和肝癌等疾病方面展现出潜在的临床应用价值。然而,目前为止,尚未见有关mi RNA-216a/b在ESCC中的相关研究。本课题拟检测ESCC患者与正常对照、ESCC患者术前与术后血浆中mi RNA-216a/b表达差异,并分析mi RNA-216a/b表达水平与患者临床病理资料之间的关系,进而评价二者在诊断ESCC方面的临床应用价值,以期为ESCC的诊断提供帮助。方法1研究对象:于郑州大学第一附属医院胸外科收集120例ESCC患者作为实验组,并收集患者的临床病理资料;另招募同期于我院体检科进行体检的51例健康人为正常对照组。2血浆标本收集与保存:抽取120例ESCC患者入院第二天、术后(其中21例患者)及51例对照组外周血标本,并立即离心分离血浆,置于-80℃冰箱保存备用。3 mi RNAs表达水平检测:采用q RT-PCR方法检测所有血浆标本中mi RNA-216a/b及内参基因mi RNA-16表达水平,并采用2-ΔCt(ΔCt=Cttarget-Ctmi RNA-16)计算所有标本中mi RNA-216a/b相对表达水平。4统计学分析:采用SPSS17.0统计学软件(SPSS Inc.,USA)进行统计学分析。正态计量资料采用mean±SD表示,分类变量采用n(%)表示,两组独立样本的比较采用独立样本t检验或Mann-Whitney U检验,配对样本的比较采用配对样本t检验,三组或三组以上样本之间的比较采用单因素方差分析或Kruskal-Wallis检验。ROC(receiver operating characteristic)曲线分析和曲线下面积(area under the curve,AUC)用于评价血浆mi RNA-216a/b对ESCC的诊断能力。以P<0.05为有统计学意义。结果1与正常对照相比,ESCC患者血浆mi RNA-216a/b表达水平明显降低(0.068±0.052 vs 0.179±0.098,P<0.0001;0.091±0.087 vs 0.199±0.161,P<0.0001)。2与术前血浆标本相比,ESCC患者术后血浆mi RNA-216b表达水平明显升高(0.132±0.037 vs 0.088±0.051,P=0.0074),而mi RNA-216a表达水平无明显差异(P>0.05)。3根据淋巴结转移情况将ESCC患者分为淋巴结转移阳性组和淋巴结转移阴性组两组,阳性组患者血浆中mi RNA-216b表达水平较阴性组患者明显降低(0.068±0.054 vs 0.134±0.117,P=0.0168),而mi RNA-216a在两组患者之间表达差异无统计学意义(P>0.05);根据TNM分期将ESCC患者分为0-Ι期、Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期四组,其中Ⅳ期患血浆中mi RNA-216a表达水平较0-Ι期和Ⅱ期患者明显降低(0.039±0.022 vs 0.088±0.062,P<0.05;0.039±0.022 vs 0.086±0.065,P<0.05);Ⅲ期患者血浆mi RNA-216b表达水平较0-Ι期明显降低(0.072±0.067 vs0.134±0.119,P<0.05)。mi RNA-216a/b表达水平与患者的其他病理资料如年龄、性别、吸烟情况、饮酒情况、肿瘤位置和肿瘤分化程度无关。4 ROC曲线分析结果显示:当cut-off值为0.070时,血浆mi RNA-216a诊断ESCC的AUC为0.877(95%CI:0.818-0.922),敏感性为80.0%,特异性为90.2%;当cut-off值0.060时,血浆mi RNA-216b诊断ESCC的AUC为0.756(95%CI:0.685-0.819),敏感性为55.8%,特异性为90.2%。结论ESCC患者血浆中mi RNA-216a/b表达水平降低,且在诊断ESCC方面展现出较好的临床应用价值,并可用于评价手术治疗效果。此外,ESCC患者血浆mi RNA-216a/b表达水平与患者的淋巴结转移和/或TNM分期呈现负相关,说明mi RNA-216a/b可能在ESCC的发生发展中发挥重要的调节作用。
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