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骨唾液酸蛋白(bone sialoprotein,BSP)是细胞外基质中的一种高度糖基化、硫酸化和磷酸化的酸性糖蛋白,含有两个保守的聚谷氨酸富集区和位于C-端的保守的RGD整合素结构序列.BSP的组织分布具有局限性,仅在矿化的组织如骨、牙齿以及钙化的软骨与骨间的界面中存在,主要由成骨细胞和破骨细胞表达和分泌.BSP被认为在矿化形成调节方面扮演重要的角色,此外近来又发出BSP与肿瘤骨转移和血管生成方面相关.因此,深入研究BSP的功能有助于指导相关疾病的诊断与治疗.目前获得BSP的途径有2个,即直接从骨中提取和利用基因工程技术表达和制备重组BSP.该文报导了非融合的人BSP在毕赤酵母GS115中的表达研究.根据Genebank中人BSP基因的参考序列设计专一性引物,以已经构建的含人BSP全长cDNA的pB-hbsp质粒为模板,PCR扩增得到人BSP基因,将人BSP基因序列经Kpn I和Xho I双酶切后定向克隆至pPICZαA载体,得到重组表达载体pPICZαA-hBSP.在此基础上构建含有串联的两个表达盒重组表达载体pPICZαA-2xhBSP.通过电转化的方法将pPICZαA-hbsp和pPICZαA-2xhbsp分别转入毕赤酵母GS115中,筛选到转化子后,用PCR鉴定表明上述两种重组质粒都分别整合到GS115基因组中,即表型为Mut<+>.甲醇诱导GS115/pPICZαA-hbsp和GS115/pPICZαA-2xhbsp工程菌,收集含有分泌的rhBSP上清.上清经SDS-PAGE检测发现在分子量介于43-66KDa之间出现一较宽条带,通过蛋白印迹实验证实此较宽的条带确为rhBSP.GS115/pPICZαA-hbsp和GS115/pPICZαA-2xhbsp两株工程细胞表达上清浓缩后的蛋白样品总浓度分别为0.122g/L和0.132g/L.这两种转化子中rhBSP的表达量并无明显差异,推测主要原因是由于这两种转化子的基因组中表达盒的数量可能相同.该文首次成功构建串联的非融合的重组人骨唾液酸蛋白基因表达盒并在毕赤酵母GS115成功进行rhBSP的表达,为rhBSP的制备提供了一条简捷途径,并有助于深入研究BSP的功能.