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大肠埃希菌是导致人和许多动物感染的一种条件致病菌,可以引起多种感染性疾病,也是临床最常见的病原微生物之一。季铵盐化合物是一种阳离子表面消毒剂,因其高效、安全、稳定等优点而应用于日常生活的众多领域,在降低感染发生和疾病传播方面发挥着关键作用。近年来,随着氟喹诺酮类抗菌药物在临床的广泛使用,大肠埃希菌对氟喹诺酮类药物耐药现象越发普遍。研究发现,大肠埃希菌经季铵盐诱导耐药后,对氟喹诺酮类抗菌药物的敏感性也同时降低,可能存在两者的交叉耐药。这种交叉耐药现象的出现,无论对临床患者的抗感染治疗还是对于环境与物品的消毒无疑都会带来相当不利的影响。研究目的了解消毒剂耐药基因的携带情况,进一步探讨外排泵AcrAB-TolC参与氟喹诺酮类抗菌药物与季铵盐化合物交叉耐药的分子机制。材料与方法收集来自2017年7月我院肠道门诊腹泻患者粪便的大肠埃希菌28株,和本研究所保存的来自本院感染科患者尿液的大肠埃希菌50株,总计78株,经常规生化对菌株进行鉴定。1.选取萘啶酸、诺氟沙星、左氧氟沙星、环丙沙星4种抗菌药物并使用K-B纸片扩散法进行药敏试验,观察实验菌株对喹诺酮类抗菌药物的耐药性,使用琼脂稀释法检测实验菌株对季铵盐化合物苯扎溴铵的敏感性。2.PCR扩增消毒耐药基因,观察消毒剂耐药基因的携带情况。3.随机选取6株菌株,并用苯扎溴铵进行诱导,观察菌株诱导前后对苯扎溴铵及环丙沙星敏感性的变化。4.提取诱导菌株及其母株的总RNA,采用实时荧光定量PCR技术检测菌株诱导前后外排泵基因acrAB-tolC的转录情况,并使用SPSS21.0软件对结果进行统计分析。实验结果经常规生化鉴定,所收集的78株菌株均为大肠埃希菌。1.药敏结果显示:萘啶酸耐药率为76.92%;左氧氟沙星耐药率为53.85%;环丙沙星耐药率为58.97%;诺氟沙星耐药率为58.97%。苯扎溴铵敏感性实验结果显示:实验菌株的MIC值范围为8-64μg/ml,MIC为32μg/ml的菌株最多(n=36,46.15%)。其次为MIC16μg/ml的菌株(n=33,42.31%),47.4%菌株的MICs值大于标准菌株。2.消毒剂耐药基因检测结果显示:suge(c)、emrE、mdfA、ydgE/F基因普遍存在(82.05%~100%),qacE△1、qacF基因检出率低(29.49%、1.28%),qacE、qacG、suge(p)基因未检出。3.苯扎溴铵对诱导菌株的MIC值提高到4-32倍,环丙沙星对诱导株的MIC值提高到4-8倍。4.诱导株acrA基因相对表达水平明显高于母株,差异有统计学意义(P<0.05)。诱导株tolC基因相对表达水平明显高于母株,差异有统计学意义(P<0.05)。结论1.大肠埃希菌对喹诺酮类抗菌药物耐药率较高,应合理规范使用抗菌药物。2.诱导菌株acrA、tolC基因转录水平的增高与氟喹诺酮类抗菌药物和季铵盐化合物交叉耐药有一定的相关性。3.季铵盐化合物的广泛使用对大肠埃希菌耐药性的潜在影响,应引起重视。