目的:通过构建真核表达pcDNA3.1/ASIC1a质粒,并将其转染进入AA大鼠关节软骨细胞,建立酸敏感通道在关节软骨细胞中过表达的模型,观察ASIC1amRNA及其蛋白的相对表达量变化,检测酸敏感通道电生理变化以及软骨细胞分泌的Ⅱ型胶原量的变化,研究酸敏感通道对关节软骨细胞代谢的影响。方法:将SD大鼠分为正常组、AA模型组,模型组大鼠左侧足趾皮弗氏完全佐剂致炎,检测大鼠继发侧关节肿胀度变化,光学显微镜观察关节病理变化。AA大鼠关节软骨细胞的培养及Alcian对软骨细胞的染色鉴定。通过PCR、琼脂糖电泳、胶回收纯化、与载体连接、感受态细菌转化、质粒提取、双酶切鉴定等一系列步骤构建转染用质粒。使用Lipofectamine2000转染试剂盒将所构建质粒转染入关节细胞,G418筛选出阳性克隆。使用荧光定量PCR和免疫细胞化学法检测ASIC1a的mRNA和蛋白的相对表达量,以鉴定模型建立的成功与否,然后进行电生理检测及细胞分泌胶原量的检测,在细胞代谢水平观察酸敏感通道的作用。结果: 1、通过对大鼠脑组织RNA的提取及逆转录,获得ASIC1a基因,并与载体连接,通过大肠杆菌培养,获得足够多的实验用转染质粒,经酶切鉴定包含目的基因,且酶切条带准确清晰。2、Lipofectamine2000细胞转染后,获得稳定阳性克隆细胞,通过对ASIC1amRNA及其蛋白相对表达量检测,表明转染后细胞无论是mRNA或者蛋白量表达都相对上升。3、通过激光共聚焦检测Ca²⁺内流,发现过表达组细胞Ca²⁺内流幅度高于模型组;免疫细胞化学法检测到过表达组细胞的Ⅱ型胶原分泌量高于模型组。结论: AA大鼠关节软骨细胞存在酸敏感离子通道的表达,且通过基因水平干预使酸通道过表达后,软骨细胞的细胞膜钙通透性发生变化,细胞外基质中Ⅱ型胶原含量也发生变化,表明酸敏感离子通道在AA大鼠关节软骨细胞代谢中发挥着重要作用,这可能为今后类风湿性关节炎的治疗提供新的靶点。