沉默Dnmt1基因表达诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化

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背景与目的:  再生医学为多种退行性疾病提供新的希望,基本原理是采用新功能细胞来代替受损细胞。干细胞生物学领域已经确定包括胚胎干细胞和成体干细胞的多种干细胞,这些干细胞具有潜在的分化人体所有细胞的功能。我们通过沉默DNA甲基化转移酶1(Dnmt1)基因表达,来探讨诱导大白鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞分化过程。  方法:  通过干扰Dnmt1基因表达的慢病毒载体,感染骨髓间充质干细胞(MSCs)后沉默Dnmt1基因的表达。在干扰Dnmt1不同的时间点:1、7、14、28天,PCR检测MSCs中Gata-4基因的甲基化水平;RT-qPCR检测心肌早期发育基因Nkx2.5及Gata-4的mRNA表达水平;Western bolt验证心肌特异蛋白MHC、cTnT及骨髓间充质干细胞分化特征蛋白质CD90、CD29的表达;免疫组化进一步检测心肌特异性蛋白质MHC的表达。  结果:  研究发现,沉默Dnmt1基因表达能够降低Gata-4的甲基化,提高心肌相关起始因子Nkx2.5及Gata-4 mRNA的表达,促进心肌特异性蛋白MHC、cTnT的表达,抑制骨髓干细胞分化蛋白CD90和CD29的表达,提高MSCs向心肌方向的分化。  结论:  本文即研究Dnmt1基因表达在大白鼠MSCs向心肌分化中的作用,为心血管病的治疗提供更好的理论基础.
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