核桃隔膜黄酮的提纯、免疫及抗肿瘤活性研究

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我国核桃资源丰富,分布广泛,往往以农副产品的形式销售,其深加工产品相对较少,而核桃中的隔膜更是在加工过程中被丢弃掉,使其不能得到充分利用。核桃隔膜作为一种药食同源的材料,其药用价值和保健价值值得深入研究和开发。所以,本文以山西汾阳核桃隔膜为原料,从中提取黄酮类化合物,并对其进行进一步分离纯化,并对其免疫活性和抗肿瘤活性进行研究,为使核桃隔膜能够充分利用,提供理论依据。主要研究成果如下:(1)采用超声波辅助提取法提取核桃隔膜黄酮:料液比为1:40,50%乙醇于50℃条件下浸提40min。在此条件下,提取核桃隔膜黄酮的得率为19.57%;(2)核桃隔膜黄酮粗品经AB-8大孔吸附树脂柱层析分离得到的FDW-1,黄酮隔膜纯度由49.56%提高至82.4%,精制倍数为1.68,纯度有了较大幅度的提升,并通过高效液相色谱法(HPLC)检测出直接测得木犀草苷4.0543 mg/g,槲皮素1.4245 mg/g,木犀草素 0.8769 mg/g;(3)核桃隔膜黄酮对环磷酰胺所致的免疫抑制小鼠的免疫功能具有显著的调节作用,能够提高免疫抑制小鼠的胸腺指数、脾脏指数,并且改善小鼠脾脏的LDH和ACP两种酶的活性,增强巨噬细胞的吞噬功能,同时还可以提高体内免疫球蛋白的数量。对环磷酰胺所致免疫低下小鼠的非特异性免疫具有增强作用:(4)核桃隔膜黄酮的体内抗肿瘤活性表明:建立H22肝癌动物模型,通过对荷瘤小鼠六周的灌胃,发现核桃隔膜黄酮可有效保护小鼠肝脏、脾脏、胸腺等免疫器官,而且可以在体内促进癌细胞的凋亡,并且提高小鼠自身免疫力来维持机体正常的代谢及免疫功能;(5)核桃隔膜黄酮的体外抗肿瘤活性研究表明:MTT实验结果表明,核桃隔膜黄酮在一定程度上能够抑制Hep G2细胞与Hela细胞的增殖,而对Hela细胞的抑制作用呈现量效关系,所以计算得出对Hela细胞的半抑制浓度(IC50)为54.35 μg/mL;通过细胞迁移实验得出核桃隔膜黄酮具有抑制细胞迁移能力的作用,通过H&E染色细胞形态学观察,发现在IC50、2IC50剂量下,细胞形态学发生了较为明显的改变。在此浓度下,通过流式细胞一的检测进一步验证了核桃隔膜黄酮对人体宫颈癌细胞Hela有一定的抑制效果。
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