虽然近年来抗肿瘤新药层出不穷,但恶性肿瘤患者的生存率和生存质量并没有显著增加,其中除了抗肿瘤药的疗效和不良反应,肿瘤的多药耐药(nultidrug resistance, MDR)已成为肿瘤化疗成功与否的关键因素。P-gp是ABC转运蛋白(ATP-依赖性转运蛋白)超级家族中的一个代表性成员,被认为在引起MDR的过程中占主导地位。Karin Klappe等发现P-gp作为细胞膜上具有重要功能的转运蛋白,是定位于脂筏区域内的,其功能的调节与脂筏中鞘脂和胆固醇的改变有关；脂筏是细胞膜双层结构内含有特殊脂质和特殊蛋白质的微区域,微区内陷部分形成的囊泡具有低流动性,呈现有序液相,富含胆固醇和鞘磷脂,脂筏内鞘脂和胆固醇的改变也可影响P-gp的定位和转运活性。目前针对耐药逆转的研究,主要围绕P-gp抑制剂展开。已有研究表明,现有的P-gp抑制剂均可显著降低耐药肿瘤细胞中P-gp的转运活性,部分可能与P-gp在基因和蛋白水平的表达下调有关,但其与脂筏是否有关系目前未见报道。本课题组前期在开展真菌耐药性研究中发现,真菌脂筏稳定性的增加可促进其耐药性的形成,并受钙调通路的正向调节。而目前已知的肿瘤P-gp抑制剂,大部分可影响钙调通路,其中环孢菌素A(CsA)为钙调神经磷酸酶抑制剂,而维拉帕米(VP)为钙通道阻滞剂。因此,本课题拟以环孢菌素A和维拉帕米为代表,研究钙调通路抑制剂是否通过影响脂筏的稳定性从而影响P-gP在脂筏上的定位并抑制其活性,从而逆转肿瘤多药耐药,以阐明P-gp抑制剂的作用机制。此外,考察具有肿瘤多药耐药逆转活性的中药单体对脂筏的影响是否也与它们类似,从而为活性中药逆转肿瘤多药耐药的机制研究提供新的思路。本课题利用乳腺癌细胞MCF-7及其耐药株MCF-7/adr,采用MTT、Real-Time-PCR、流式测胞内药物积累、蔗糖密度梯度离心提取脂筏、Western blot及激光共聚焦显微镜检测等方法,考察CsA或VP对细胞脂筏及P-gp定位等的影响,结果显示：①CsA或VP都能逆转MCF-7/adr细胞对Dox的耐药性；②CsA或VP能显著增加Dox或Rh6g在MCf-7/adr细胞内的积累,即CsA或VP能抑制多药耐药蛋白P-gp的转运活性；CsA或VP作用后P-gP在mRNA及蛋白水平表达均增加；③CsA或VP能破坏脂筏稳定性以及耐药蛋白P-gp在细胞膜上的定位；④脂筏稳定性破坏剂M-β-CD能减弱MCF-7/adr对Dox的耐药性,同时能显著增加Rh6g在胞内的积累,即其能抑制P-gp的活性,但对Dox胞内积累影响不明显；⑤脂筏稳定性破坏剂M-β-CD破坏脂筏后对P-gp在细胞膜上的定位有影响；⑥中药青蒿琥酯具有逆转MCF-7/adr对Dox耐药性的活性：其能显著增加Dox或Rh6g在MCF-7/adr细胞内的积累,即其具有抑制多药耐药蛋白P-gp转运活性；⑦青蒿琥酯对脂筏稳定性及P-gp的定位有影响。因此我们推测：CsA或VP能通过影响脂筏稳定性从而影响P-gp在脂筏的定位并抑制其转运活性,而在此过程中P-gp可能由于反馈调节而表达升高,但其活性并没有升高；利用胆固醇耗竭剂M-β-CD破坏脂筏也能抑制P-gp的转运活性,表明钙离子阻滞剂VP或钙调通路抑制剂CsA可能也是通过影响脂筏来影响P-gp的转运活性从而逆转耐药的。结论：脂筏在CsA或VP逆转肿瘤多药耐药过程中起关键调节作用,即CsA或VP通过影响脂筏稳定性从而影响P-gp在脂筏的定位并抑制其转运活性,这可能是P-gp抑制剂逆转肿瘤耐药主要机制之一；筛选发现,中药成分青蒿琥酯也能影响脂筏的稳定性及P-gp在脂筏的定位,并能逆转耐药细胞MCF-7/adr对Dox的耐药性,是上述机制的又一有力证据。