作为柑橘大省，湖南近年来先后报道了柑橘衰退病(CitrusTristezaVirus，CTV)、碎叶病(CitrusTatterLeafVirus,CTLV)、裂皮病(CitrusExocortisViroid,CEVd)和温州蜜柑萎缩病(SatsumaDwarfVirus，SDV)等病毒类病害的存在，为我省柑橘病毒的预防敲响警钟。长期以来，由于抗CTV枳壳(Poncitrustrifoliate)砧的大量使用，使得CTV并未对湖南地区的柑橘生产造成重大影响，但近年来随着对茎陷点型的CTV强毒系的入侵，CTV对我省柑橘的危害越来越严重；同时，由于枳砧对CTLV和CEVd高度敏感，一旦感病则很难防治。防止柑橘病毒类病害发生和蔓延的根本途径是建立无病毒苗木繁育体系，推广使用无病毒苗木，而病毒病的快速准确的检测则是这一途径的保障。因此，本研究旨在建立一种快速、准确而有效的病毒和类病毒分子检测体系；同时，通过RT-PCR结合测序的方法初步筛选出CTV的弱毒株系，为CTV交叉保护(Mildstraincrossprotection，MSCP)在生产实践中的应用奠定基础。 本实验取得的具体研究结果如下： 1.建立了CTV、CEVd和CTLV检测体系 以来自中柑所经指示植物鉴定已感染CTV和CEVd的样品和湖南本地带有典型CTLV症状的样品叶片为毒源，分别建立起CTV、CEVd和CTLV的RT-PCR检测体系。 用CTV、CEVd和CTLV的RT-PCR检测体系，对47份引种材料感病情况的检测发现；其中高接于甜橙成年树的10个样品有8个带有CTV，除此之外的材料均未感染CTV；47份材料均未检测到CEVd和CTLV；之后又对某柑橘园22个不同品种带病情况的调查，结果如下：21个检测到CTV，2个检测到CTLV，并且检测到CTLV的2个样品同时也检测到CTV，说明是复合感染，没有检测到CEVd。 2.进行了病毒株系的测序和同源性序列分析 对21份感染CTV的单株进行p33基因片断进行测序，结果的分析发现其中只有13个是互异的，在系统发育树中它们被分为A、B、C和D四大簇，其中湖南地区的大部分CTV样品和来自重庆地区的3个样品，同VT、NUAGA和T318A一起分在A簇；冰糖橙样品H12被单独分在B簇，这可能是湖南的地方株系。 对带有典型CEVd症状的分离株CEVd-YN和CEVd-XN序列分析发现：CEVd-HN和基因库中CEVd-HB株系完全同源，CEVd-YN和CEVd-HB株系同源性最高，为97.85﹪。同强毒系CEVd-A的同源性为94.91﹪，有19个碱基变异；同弱毒株系CEVd-de26的同源性为97.04﹪，有11个碱基变异。 对带有典型CTLV症状的CTLV-HN分离株序列分析发现：CTLV-HN和序列号为D14455、D16681序列的同源性最高，为92.49﹪；系统发育树分类图中，CTLV-HN单独分在B簇，可能是中国特有的CTLV株系。 3.对湖南CTV弱毒株进行的筛选 用RT-PCR初步筛选出13个弱毒株，将其中的8个分离株样品进行测序分析，结果发现其中1个分离株的氨基酸序列和Sambade等分析发现的CTV弱毒株所特有的9个氨基酸位点的序列完全一致，5个分离株样品仅存在一个位点的变异，以上6个单株均可能使CTV弱毒株系。这是首次在湖南分离得到的CTV弱毒株系，将上述6个弱毒株系嫁接于网室内无病毒枳壳苗木上，以便进一步的生物学鉴定和交叉保护测试，为将来在该地区进行CTV弱毒系的交叉保护的研究打下基础。