论文部分内容阅读
本论文以提高茶皂甙的生物活性为目的,采用生物转化的方法改变茶皂甙的结构以获得高活性的茶皂甙。研究中采用AB-8大孔树脂提取和纯化茶皂甙,通过四因素四水平正交试验设计研究了茶皂甙生物转化的最佳条件,采用薄层层析(TLC)和高效液相色谱(HPLC)对酶解前后的皂甙进行分析,通过超高压液相色谱-质谱联用技术(LC-Q-TOF-MS/MS)对酶解后的皂甙进行结构鉴定。在AB-8大孔树脂纯化茶皂甙过程中,考察了洗脱剂浓度和碱液浓度对皂甙洗脱效果的影响。用不同浓度的NaOH溶液除杂,不同浓度的乙醇洗脱,通过分光光度计检测所提取的茶皂甙的纯度,通过考察茶皂甙的回收率和纯度确定最佳的碱液浓度和洗脱剂浓度,最终选取最佳碱液浓度为0.1%,最佳洗脱剂浓度80%。考察了Aspergillus niger48s水解茶皂甙的反应条件,通过正交实验最终确定最佳反应条件为反应温度45℃,底物浓度6mg/ml,pH值6,反应时间10h。对酶解前后皂甙进行TLC分析,选择展开剂为氯仿:甲醇:水=7.4:2.6:1,得到迁移率分别为0.73、0.65、0.47、0.44四种新皂甙,进一步采用HPLC分析验证酶解后有新皂甙产生。为了进一步确定酶解后产生新皂甙的结构,分别对酶解前后的皂甙溶液做LC-MS/MS检测,检测出并确定油茶中茶皂甙分子量为1120、1262、1232、1190、1202等5种茶皂甙,分别为脱氢山茶皂甙B、茶皂甙A5、茶皂甙A2、茶皂甙A1和山茶皂B1。同时,在酶解产物中检测到2种分子量分别为981和967的低糖链茶皂甙。通过与已有皂甙对比及二级质谱(MS/MS)分析发现分子量为981和967的皂甙为新皂甙,其结构分别为:分子量981新皂甙分子式为C49O22H73,是3-氧-[β-D-吡喃葡萄糖醛酸基-(1-2)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸基]-21-当归酸基-28-乙酸基-茶皂甙元A。推测该皂甙是茶皂甙A2酶解掉一分子木糖、一分子阿拉伯糖和一分子半乳糖后又结合了一分子的葡萄糖醛酸生成的新皂甙,或者是茶皂甙A5酶解掉一分子木糖、一分子葡萄糖和一分子半乳糖后又结合了一分子的葡萄糖醛酸;分子量为967的皂甙分子式为C49O19H75,是3-氧-[-β-D-吡喃葡萄糖醛酸基-(1-2)-β-D-吡喃半乳糖基]-21-当归酸-28-乙酸-茶皂甙元A。推测该皂甙是茶皂甙A5失去一分子葡萄糖和一分子阿拉伯糖得到的新皂甙或者茶皂甙A2失去一分子木糖和一分子阿拉伯糖得到的新皂甙。