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原花青素是植物中广泛存在的一大类多酚类化合物的总称,由不同数量的儿茶素或表儿茶素结合而成。具有多种生物活性,是种很强的抗氧化剂,清除体内自由基作用明显,且其具有高效、低毒、高生物利用度等特性。柳树是一种在我国分布广泛的观赏性植物,其中的原花青素含量相对较高。本文研究了柳树叶中原花青素的提取、纯化精制及精制品的抗氧化性、抑菌性和稳定性等性质特征。
本文以柳树叶为原料,通过控制乙醇浓度、提取温度、提取时间、料液比、乙酸加入量等单因素和正交实验,用热回流法对原花青素的提取工艺进行了研究。最佳条件为:80℃的温度用70%的乙醇以1:20的料液比,加0.25%的乙酸提取2小时。然后进行对试验方案进行验证,以最佳方案条件进行提取,原花青素得率为11.984 mg/g。(即每克干的柳树叶粉末中提取了11.984mg的原花青素)。
将原花青素粗提液用1倍体积石油醚和3倍体积丙酮萃取后,其纯度能达到15.9%,萃取率达86%。用AB-8大孔树脂装柱纯化原花青素,上样速度2BV/h,反复上样3次,让其充分吸附,再用双蒸水2BV/h的速度洗脱,直至洗脱液无色,然后用40%乙醇以1.6mL/min的流速洗脱,收集洗脱液2BV.。这样可以达到71.1%的洗脱率和58.3%的纯度。其平均聚合度(DP)为2.57。
对原花青素精制物的部分功能做了测定。经过大孔树脂纯化精制过的原花青素对肝癌细胞Hepg2是有抑制作用的,且在测定的浓度范围(80-320μg/mL)内存在剂量效应关系。在抑菌性上,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌表现了一定的抑菌效果,对黑曲霉有较强的抑菌效果。
在对原花青素的抗氧化性测定中,通过化学比色法测定了柳树叶原花青素的总抗氧化力、还原力、对O-2、·OH、H2O2和NO-2的清除作用,并用Vc与之作效果比较。表明,原花青素具有较强的抗氧化性,在测定的各项指标中其抗氧化活性均强于Vc。证明原花青素是一种较好的抗氧化剂。
在对原花青素稳定性的测定中,表明原花青素在避光、低温条件下保存较稳定。同时一些金属离子如Fe2+和Cu2+对原花青素稳定性有影响,应注意避免这些离子的存在,不同pH对原花青素稳定性也有影响,pH值越高,原花青素的稳定性越差,pH越低,原花青素越稳定。