背景和目的甲状腺癌是头颈部常见的恶性肿瘤之一,也是内分泌系统最常见的恶性肿瘤,其发病率和死亡率在头颈部恶性肿瘤中居于首位,近年来许多资料表明甲状腺癌的发病率在全球范围内都有逐年上升的趋势。甲状腺癌具有侵袭性强和易转移的特点,转移和复发往往是导致肿瘤治疗失败和患者死亡率增加的主要原因。因此控制甲状腺癌的发展和浸润转移成为该领域的研究热点。甲状腺癌的发生发展、浸润转移是一个多阶段、多步骤、多因素进行的复杂过程,包括了多种基因及其蛋白产物的参与。CD147,即细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer),是一种高度糖基化的、分子量为50-60KD、广泛表达于人体多种组织的单次跨膜糖蛋白,属于免疫球蛋白超家族成员。近年来的大量研究表明,CD147在多种肿瘤细胞中异常高表达,并主要通过诱导基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs)的分泌促进肿瘤的浸润和转移。MMPs家族是一个高度保守的内源性蛋白水解酶家族,是细胞外基质的主要调节物质,几乎能够降解细胞外基质的所有成分,其中MMP-2是家族中的主要成员之一,主要作用于基底膜上的Ⅳ型胶原,在肿瘤细胞突破基底膜屏障,发生侵袭转移的过程中发挥重要作用。AnnexinⅡ是钙离子介导的磷脂结合蛋白家族中的成员之一,参与一系列依赖于钙离子的膜性生物学功能。在多种肿瘤中高表达,并能通过与组织纤溶酶原激活剂(t-PA)、纤溶酶原、纤溶酶、细胞粘合素C、前组织蛋白酶B、S100A4等的相互作用,促进细胞外基质降解,从而加速肿瘤细胞向周围组织浸润,并发生淋巴结转移及远处转移。有研究报道,AnnexinⅡ可能是CD147的受体。有关联合检测CD147、MMP-2、AnnexinⅡ三者在甲状腺癌组织中的表达及其与肿瘤发生发展关系的研究,至今尚未见文献报道。为进一步探讨三者与甲状腺癌发生发展和转移之间的关系,寻找甲状腺癌的早期诊断指标、恶性程度评估因子以及探索甲状腺癌新的治疗靶点,本研究采用免疫组织化学SP法检测CD147、MMP-2、AnnexinⅡ在50例甲状腺乳头状癌组织和50例非癌组织中的蛋白表达情况,采用原位杂交技术检测CD147在50例甲状腺乳头状癌组织和50例非癌组织中的mRNA表达情况,探讨CD147、MMP-2、AnnexinⅡ之间的相关关系及可能的作用机制,旨在阐明其表达与甲状腺乳头状癌发生发展及浸润转移之间的关系,为甲状腺乳头状癌的诊断、治疗及预后评估提供实验基础和理论依据。方法1.采用免疫组织化学SP方法分别检测50例甲状腺乳头状癌组织、14例甲状腺腺瘤组织、26例结节性甲状腺肿组织和10例正常甲状腺组织中CD147、MMP-2、Annexinll蛋白的表达。2.采用原位杂交技术检测50例甲状腺乳头状癌组织、14例甲状腺腺瘤组织、26例结节性甲状腺肿组织和10例正常甲状腺组织中CD147mRNA的表达。3.统计学处理：应用SPSS 17.0统计学软件处理,率的比较采用x2检验(chi-square),相关分析采用Spearmen相关分析。显著性水准α=0.05。结果1.CD147蛋白在甲状腺乳头状癌组织、甲状腺腺瘤组织、结节性甲状腺肿组织、正常甲状腺组织中表达的阳性率分别为76.00%(38/50)、35.71%(5/14)、34.62%(9/26)、30.00%(3/10)。CD147蛋白在甲状腺腺瘤组织、结节性甲状腺肿组织、正常甲状腺组织中的阳性表达均明显低于其在甲状腺乳头状癌组织中的表达,差异均有统计学意义(P<0.05)；而甲状腺腺瘤组织、结节性甲状腺肿组织、正常甲状腺组织中CD147蛋白的表达两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。CD147蛋白的表达与甲状腺乳头状癌患者的性别、年龄无关,在男性患者的癌组织中其阳性表达率为83.33%(5/6),在女性患者的癌组织中为75.00%(33/44),两者比较差异无统计学意义(P>0.05)；在年龄<45岁的癌症患者组织中CD147的阳性表达率为76.92%(20/26),在年龄≥45岁的癌症患者组织中其阳性表达率为75.00%(18/24),差异亦无统计学意义(P>0.05)。而随着甲状腺乳头状癌直径的增大,CD147蛋白的表达逐渐升高,两者呈正相关关系,在肿瘤直径<1.0cm的癌组织中其阳性表达率为55.00%(11/20),在肿瘤直径≥1.0cm的癌组织中为90.00%(27/30),两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。CD147蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达与淋巴结转移也呈现正相关,在有淋巴结转移组中的阳性表达率为90.48%(19/21),在无淋巴结转移组中的阳性表达率为65.52%(19/29),差异有统计学意义(P<0.05)。2.MMP-2蛋白在甲状腺乳头状癌组织、甲状腺腺瘤组织、结节性甲状腺肿组织、正常甲状腺组织中表达的阳性率分别为78.00%(39/50)、42.86%(6/14)38.46%(10/26)、30.00%(3/10)。MMP-2蛋白在甲状腺腺瘤组织、结节性甲状腺肿组织、正常甲状腺组织中的阳性表达均明显低于其在甲状腺乳头状癌组织中的表达,差异均有统计学意义(P<0.05)；而甲状腺腺瘤组织、结节性甲状腺肿组织、正常甲状腺组织中MMP-2蛋白的表达两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。MMP-2蛋白的表达与甲状腺乳头状癌患者的性别、年龄无关,在男性患者的癌组织中其阳性表达率为66.67%(4/6),在女性患者的癌组织中为79.55%(35/44),两者比较差异无统计学意义(P>0.05)；在年龄<45岁的癌症患者组织中MMP-2的阳性表达率为80.77%(21/26),在年龄≥45岁的癌症患者组织中其阳性表达率为75.00%(18/24),差异亦无统计学意义(P>0.05)。而随着甲状腺乳头状癌直径的增大,MMP-2蛋白的表达逐渐升高,两者呈正相关关系,在肿瘤直径<1.0cm的癌组织中其阳性表达率为55.00%(11/20),在肿瘤直径≥1.0cm的癌组织中为93.33%(28/30),两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。MMP-2蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达与淋巴结转移也呈现正相关,在有淋巴结转移组中的阳性表达率为95.24%(20/21),在无淋巴结转移组中的阳性表达率为65.52%(19/29),差异有统计学意义(P<0.05)。3. AnnexinⅡ蛋白在甲状腺乳头状癌组织、甲状腺腺瘤组织、结节性甲状腺肿组织、正常甲状腺组织中表达的阳性率分别为74.00%(37/50)、35.71%(5/14)、30.77%(8/26)、10.00%(1/10)。AnnexinⅡ蛋白在甲状腺腺瘤组织、结节性甲状腺肿组织、正常甲状腺组织中的阳性表达均明显低于其在甲状腺乳头状癌组织中的表达,差异均有统计学意义(P<0.05)；而甲状腺腺瘤组织、结节性甲状腺肿组织、正常甲状腺组织中AnnexinⅡ蛋白的表达两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。AnnexinⅡ蛋白的表达与甲状腺乳头状癌患者的性别、年龄无关,在男性患者的癌组织中其阳性表达率为66.67%(4/6),在女性患者的癌组织中为75.00%(33/44),两者比较差异无统计学意义(P>0.05)；在年龄<45岁的癌症患者组织中AnnexinⅡ的阳性表达率为73.08%(19/26),在年龄≥45岁的癌症患者组织中其阳性表达率为75.00%(18/24),差异亦无统计学意义(P>0.05)。在直径<1.0cm的甲状腺乳头状癌组织中AnnexinⅡ的阳性表达率为60.00%(12/20),在肿瘤直径≥1.0cm的癌组织中其阳性表达率为83.33%(25/30),随着甲状腺乳头状癌直径的增大,AnnexinⅡ蛋白的表达也逐渐升高,但两者比较其差异无统计学意义(P>0.05)。AnnexinⅡ蛋白在癌组织中的表达与淋巴结转移密切相关,两者呈正相关关系,在有淋巴结转移组中的阳性表达率为90.48%(19/21),在无淋巴结转移组中的阳性表达率为62.07%(18/29),差异有统计学意义(P<0.05)。4. CD147mRNA在甲状腺乳头状癌组织、甲状腺腺瘤组织、结节性甲状腺肿组织、正常甲状腺组织中表达的阳性率分别为74.00%(37/50)、28.57%(4/14)、26.92%(7/26)、20.00%(2/10)。CD147mRNA在甲状腺腺瘤组织、结节性甲状腺肿组织、正常甲状腺组织中的阳性表达均明显低于其在甲状腺乳头状癌组织中的表达,差异均有统计学意义(P<0.05)；而甲状腺腺瘤组织、结节性甲状腺肿组织、正常甲状腺组织中CD147mRNA的表达两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。CD147mRNA的表达与甲状腺乳头状癌患者的性别、年龄无关,在男性患者的癌组织中其阳性表达率为66.67%(4/6),在女性患者的癌组织中为75.00%(33/44),两者比较差异无统计学意义(P>0.05)；在年龄<45岁的癌症患者组织中CD147mRNA的阳性表达率为76.92%(20/26),在年龄≥45岁的癌症患者组织中其阳性表达率为70.83%(17/24),差异亦无统计学意义(P>0.05)。而随着甲状腺乳头状癌直径的增大,CD147mRNA的表达逐渐升高,两者呈正相关关系,在肿瘤直径<1.0cm的癌组织中其阳性表达率为45.00%(9/20),在肿瘤直径≥1.0cm的癌组织中为93.33%(28/30),两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。CD147mRNA在甲状腺乳头状癌中的表达与淋巴结转移也呈现正相关,在有淋巴结转移组中的阳性表达率为90.48%(19/21),在无淋巴结转移组中的阳性表达率为62.07%(18/29),差异有统计学意义(P<0.05)。5.在甲状腺乳头状癌组织中,同时表达CD147、MMP-2、AnnexinⅡ三种蛋白的阳性率为62.00%(31/50)。三者的联合表达与甲状腺乳头状癌患者的性别、年龄无关,与肿瘤的直径和淋巴结转移密切相关,呈正相关关系。在男性患者的癌组织中,三种蛋白的联合表达阳性率为66.67%(4/6),在女性患者组织中为61.36%(27/44),两组比较差异无统计学意义(P>0.05)；在年龄≥45岁的患者癌组织中,三种蛋白的联合表达阳性率为62.50%(15/24),在<45岁的患者组织中为61.54%(16/26),两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。在肿瘤直径≥1.0cm的患者癌组织中,三种蛋白的联合表达阳性率为80.00%(24/30),在肿瘤直径<1.0cm的患者组织中,三种蛋白的联合表达阳性率为35.00%(7/20),两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。在伴有淋巴结转移的患者癌组织中,三种蛋白的联合表达阳性率为85.71%(18/21),在无淋巴结转移的患者组织中,三种蛋白的联合表达阳性率为44.83%(13/29),两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。6.在甲状腺乳头状癌组织中,CD147蛋白和MMP-2蛋白的表达呈正相关(r=0.380,P<0.05)；CD147蛋白和AnnexinⅡ蛋白的表达呈正相关(r=0.521,P<0.05)；MMP-2蛋白和AnnexinⅡ蛋白的表达呈正相关(r=0.676,P<0.05)；CD147蛋白和CD147mRNA的表达呈正相关(r=0.735,P<0.05)。结论1. CD147、MMP-2、AnnexinⅡ蛋白及CD147mRNA在正常甲状腺组织、结节性甲状腺肿组织、甲状腺腺瘤组织、甲状腺乳头状癌组织中的阳性表达率呈现逐渐升高趋势,且在癌组织中的表达显著高于在非癌组织中的表达,提示CD147、MMP-2、AnnexinⅡ蛋白可能参与了甲状腺乳头状癌的发生过程。2. CD147、MMP-2蛋白和CD147mRNA的阳性表达率随着肿瘤直径的增大和淋巴结的转移而逐渐升高,AnnexinⅡ蛋白的表达随着淋巴结的转移而逐渐升高,表明CD147、MMP-2、AnnexinⅡ蛋白的高表达可能与甲状腺乳头状癌的发展和淋巴结转移有关。3. CD147、MMP-2、AnnexinⅡ蛋白在甲状腺乳头状癌中均呈现高表达,两两之间分别呈正相关关系,且三者的联合表达与肿瘤的大小和淋巴结转移密切相关,提示三者可能在甲状腺乳头状癌的发生发展及淋巴结转移过程中起协同作用。