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国内外的研究证实，过度活化的补体片段介导的严重创（烧）伤后并发机会病原菌感染、缺血再灌注损伤等疾病，除了C5a之外还有C3a和C5b-9等成分的共同作用。所以，只针对某一种补体活化片段的防治研究显然是局限的。在经典、旁路和MBL三个补体激活途径中，都以C3活化为中心，小分子sCR1（SCR15-18）既可灭活C3／C5转化酶，又能结合C3b，并且还能辅助Ⅰ因子裂解C3b，阻断C5a和C5b-9等片段的生成。本文为了构建原核表达质粒pET32-sCR1-SCR15-18，获得具有生物学活性的sCR1结合功能域片段，采取从人外周血单核细胞中提取总RNA，以RT-PCR法克隆sCR1结合C3b功能域（SCR15-18）基因片段；再将目的基因插入pMD18-T载体中进行核苷酸序列鉴定；构建到原核表达载体pET32a，转化入表达宿主菌BL21，经抗性筛选与阳性重组子酶切鉴定后；用IPTG诱导表达，用镍柱纯化目的蛋白；并观察表达产物抑制补体溶血反应活性。研究取得了以下主要结果： 1．从人外周血单核细胞中提取总RNA，并以此为模板设计引物，经RT-PCR成功地克隆了编码人补体受体Ⅰ型胞外区sCR1-SCR15-18的cDNA（其长度为753bp），连接于T-载体后测序，经查对与GenBank上登录的编码相应补体受体Ⅰ型胞外区cDNA的序列完全一致。 2．将测序正确的目的片段插入原核表达质粒pET32，成功地构建了重组原核表达质粒pET32-sCR1-SCR15-18。氨苄青霉素筛选出阳性重组子的质粒经酶切鉴定确认。 3．将上述质粒转化大肠杆菌BL21，经IPTG诱导，均获得了较高水平的表达，并确立sCR1在大肠杆菌中高效表达的最佳诱导表达条件为终浓度1mmol／L的IPTG在37℃诱导表达4小时。SDS-PAGE分析可见，表达蛋白的大小约为43kDa，主要是以包涵体的形式存在。表达产物经Western blot分析显示，在分子量约43kDa处出现单一条带，呈现阳性反应。 4．经Ni2+-NTA纯化系统及尿素分步透析，表达蛋白得到了有效纯化和复性，纯化蛋白在SDS-PAGE上呈现单一条带。 5．生物学活性分析显示，所纯化的目的蛋白能抑制补体的溶血反应。 综上所述：本实验成功的构建了原核表达质粒pET32-sCR1-SCR15-18，获得了具第三军医大学硕士学位论文有抑制补体反应活性的sCRI结合功能域片段。为进一步大规模高效表达和纯化sCRI一SCR15一18目的蛋白提供了可靠的实验方法，也为由补体介导的严重创（烧）伤后并发机会病原菌感染、缺血再灌注损伤等疾病的防治研究奠定了基础。