论文部分内容阅读
目的: 检测柯氏棒状杆菌(Corynebacterium kroppenstedtii，CK)对BMDC(Bone marrow-derived dendritic cell，BMDC)的活化刺激作用，以及该BMDC对Th细胞亚群分化的调节，初步探讨CK的免疫刺激效应。 方法: 1.通过检测细菌的16S rDNA基因序列确认CK标准菌株CCUG35717和产丙酮酸棒状杆菌（Corynebacterium pyruviciproducens，CP）标准菌株CCUG57046; 2.体外诱导小鼠骨髓来源的树突状细胞(Bone marrowderived-dendritic cell，BMDC)，并通过流式细胞术检测CD11c+细胞的比例，确定BMDC的纯度; 3.以CP为对照菌株，通过流式细胞术检测BMDC经CK刺激后其表面共刺激分子（CD40、CD80和CD86）和MHCⅡ类分子的表达水平; 4.BMDC经CK刺激后，通过qRT-PCR技术检测相关炎性细胞因子mRNA（IL-12p35、IL-6、IL-23和TGF-β）表达水平的变化，并通过ELISA检测培养上清中相应细胞因子（IL-12、IL-6、IL-23和TGF-β）蛋白水平的变化; 5.磁珠分选C57BL/6小鼠脾脏中的CD4+T细胞，将CK/CP处理过的BMDC与CD4+T细胞以一定的比例（BMDC∶CD4+T为1∶5）进行共培养72 h后，qRT-PCR技术检测CD4+T细胞中T-bet和ROR-γt的mRNA表达水平;ELISA检测共培养上清中IFN-γ和IL-17的浓度;流式细胞术检测Th1和Th17细胞的比例。 结果: 1.将CK和CP的基因序列检测结果与GenBank上16S rDNA的序列进行Blast比对，确认为标准菌株; 2.成功诱导了BMDC，诱导得到的CD11c+细胞的比例大于80％; 3.CK能够上调BMDC表面MHCⅡ类分子和共刺激分子(CD40、CD80和CD86)的表达，促进BMDC的成熟; 4.与对照菌株CP相比，无论是mRNA的表达水平还是蛋白的表达水平，CK能够有效地促进BMDC产生和分泌IL-12(P＜0.05)、IL-6(P＜0.001)、IL-23(P＜0.001)和TGF-β(P＜0.01)等炎性细胞因子。 5.BMDC与CD4+T细胞的共培养结果显示，CK处理后的BMDC能够上调CD4+T细胞中T-bet(P＜0.01)和ROR-γt(P＜0.001) mRNA的表达，同时增强CD4+T细胞中IFN-γ(P＜0.001)和IL-17(P＜0.001)的分泌能力，且Th1和Th17细胞的比例也有所增高。 结论: 1.CK能够活化BMDC并上调BMDC表面分子(MHCⅡ、CD40、CD80和CD86)的表达，从而促进BMDC的成熟; 2.CK通过促进BMDC分泌相应的炎性细胞因子进而激活CD4+T细胞;上调CD4+T细胞中T-bet和ROR-γt mRNA的表达;增强CD4+T细胞分泌IFN-γ和IL-17的能力;具有促进CD4+T细胞向Th1和Th17分化的能力。