【摘 要】
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目的:通过使用乌梅丸含药血清对西妥昔单抗耐药细胞株H508/C225的干预,观察乌梅丸对其耐药的影响,并对其可能存在的机制进行初步探讨。方法:①通过CCK-8法检测西妥昔单抗对H508、H508/C225细胞增殖抑制作用、乌梅丸含药血清对H508/C225的细胞毒性以及乌梅丸与西妥昔单抗联合使用,观察乌梅丸能否逆转耐药;②运用蛋白质免疫印迹法（western blot）检测各实验组（空白对照组、西
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目的:通过使用乌梅丸含药血清对西妥昔单抗耐药细胞株H508/C225的干预,观察乌梅丸对其耐药的影响,并对其可能存在的机制进行初步探讨。方法:①通过CCK-8法检测西妥昔单抗对H508、H508/C225细胞增殖抑制作用、乌梅丸含药血清对H508/C225的细胞毒性以及乌梅丸与西妥昔单抗联合使用,观察乌梅丸能否逆转耐药;②运用蛋白质免疫印迹法（western blot）检测各实验组（空白对照组、西妥昔单抗组、乌梅丸含药血清组、联合用药组）药物干预48h后提取出来的细胞总蛋白中Bcl-2、bax、kras、erk、p-erk的表达水平,并利用实时荧光定量技术（realtime PCR）检测相关基因的改变。结果:①耐药指数（RI）:西妥昔单抗对亲本细胞H508的IC50值是36.24ug/ml;对耐药细胞H508/C225的IC50值是267.4ug/ml。耐药指数是7。②乌梅丸含药血清的细胞毒性:不同体积分数的乌梅丸含药血清对H508/C225细胞具有不同程度的抑制作用,并呈剂量依赖。③逆转耐药倍数（RF）:10%的乌梅丸含药血清与不同浓度的西妥昔单抗（6.25、12.5、25、50、100ug/ml）联合使用时IC50为76.3,逆转耐药倍数为3.7。④western blot结果显示:联合用药组与空白组相比较ERK1/2、P-Erk1/2表达降低,抗凋亡蛋白Bcl-2表达下降,促凋亡蛋白Bax表达升高,KRAS蛋白表达升高。⑤Real-Time PCR结果显示:联合用药组与空白组相比较Bcl-2 mRNA表达降低,Bax mRNA的表达升高,且具有统计学意义;其余各给药组与空白组ERK1/2、MEK、Raf-1、KRAS mRNA的表达相比较不具有统计学意义。结论①乌梅丸能够显著的逆转人结直肠癌H508/C225细胞株的耐药性;②乌梅丸逆转结直肠癌耐药的作用可能是通过诱导细胞凋亡来实现的;③乌梅丸通过Ras/Mapk信号通路的来逆转结直肠癌耐药的机制仍有待于进一步研究。
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