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目的:近年来的大量研究结果证实了长链非编码RNA SPRY4-IT1在肿瘤的发生发展中发挥越来越重要的作用,参与肿瘤的增殖、迁移、侵袭和凋亡,与肿瘤的预后有关。已有研究表明长链非编码RNA SPRY4-IT1在黑色素瘤、脑胶质瘤中高表达,并能促进肿瘤细胞的迁移和侵袭。本研究通过检测SPRY4-IT1在结直肠癌组织中的表达,研究SPRY4-IT1对结直肠癌细胞HT-29生物学行为的影响,初步证实SPRY4-IT1在结直肠癌中的作用及相关分子机制。方法:1.收集苏州大学附属第二医院2015年10月-2016年6月普外科58例结直肠癌的手术标本(包括癌组织和距癌组织>5cm的癌旁正常组织),采用实时荧光定量聚合酶链反应(Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction,qRT-PCR)方法检测LncRNA SPRY4-IT1在58例结直肠癌组织和对应癌旁组织的相对表达,并分析SPRY4-IT1表达和临床资料、病理特征之间的关系。2.检测LncRNA SPRY4-IT1在结直肠细胞株(HT-29、HCT-116、SW-480、SW-620、Caco-2)和正常肠上皮细胞(FHC)的表达差异。选择SPRY4-IT1相对表达最高的结直肠癌细胞HT-29,使用慢病毒介导的LncRNA SPRY4-IT1过表达载体、干扰载体及无义转染序列,建立HT-29过表达(上调组)、干扰(下调组)及无义转染的稳转细胞株,运用CCK-8检测细胞增殖活性,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,Flow Cytometry方法检测细胞凋亡和细胞周期;分析SPRY4-IT1对正常细胞(空白对照组)、无义转染组、上调组及下调组细胞,在细胞增殖活性、克隆形成能力、总凋亡率及细胞周期等方面的影响;并运用Western Blot检测SPRY4-IT1对各组细胞中凋亡相关蛋白如Bcl-2、Bax、Caspase3、Caspase9的表达。3.运用克隆形成实验、CCK-8、Flow Cytometry方法检测空白对照组、无义转染组、上调组及下调组放射治疗后,分析X线照射对HT-29各组细胞生存分数、增殖活性、凋亡与细胞周期的影响,以及相对应未照射细胞增殖、凋亡及细胞周期等方面的差异;同时运用Western Blot检测照射前后HT-29各组细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase3、Caspase9的表达。结果:1.LncRNA SPRY4-IT1在结直肠癌组织相对于癌旁的表达有显著差异(8.74±1.71vs.1.00±0.00)、(P<0.001),在65.52%(38/58)结直肠癌组织的相对表达高于2倍以上,并证实其表达与肿瘤的大小(P=0.044)、肿瘤的浸润程度(P<0.001)、分化程度(P=0.019)、淋巴结转移(P<0.001)、TNM分期(P<0.001)、血清CEA水平(P=0.026)有明显差异,与患者的年龄(P=0.446)、性别(P=0.837)、肿瘤的位置(P=0.425)、血清CA19-9水平(P=0.103)无明显统计学差异。2.LncRNA SPRY4-IT1在结直肠细胞株(HT-29、HCT-116、SW-480、SW-620、Caco-2)相对于正常肠上皮细胞(FHC)的表达均具有明显差异(P<0.05)。相对于空白对照组、无义转染组,上调组细胞HT-29增殖活性增强、克隆形成率升高,总凋亡率降低(P<0.05或<0.01);而下调组细胞增殖活力减弱、克隆形成率降低,总凋亡率升高(P<0.05或<0.01);在各组细胞间,细胞周期分布比较,P均>0.05。相对于空白对照组、无义转染组,上调组细胞Bcl-2表达增多,Bax、Caspase3、Caspsase9表达减少((P<0.05或<0.01));下调组细胞Bcl-2表达减少,Bax、Caspase3、Caspsase9表达增多(P均<0.01)。上调组细胞增殖活性、克隆形成能力增强,细胞凋亡降低,说明过表达后其致癌性增强;下调组细胞增殖、克隆能力减弱,而细胞凋亡增加,说明干扰下调后其致癌性下降。3.克隆形成实验证实:相对于无义转染组和空白对照组,上调组放射增敏比(SER)分别是(1.235或1.1957),下调组SER值分别是(0.6475或0.6686),下调SPRY4-IT1的表达可提高结直肠癌细胞HT-29的放射敏感性。对HT-29各组细胞进行照射后发现,各组细胞和照射前比较细胞增殖活性降低、总凋亡率增加以及细胞周期G2/M期阻滞增加,其中下调照射组细胞生存分数降低、增殖活性降低、总凋亡率增加以及细胞周期G2/M期阻滞增加均最为显著。相对于照射前,照射后的各组细胞,Bcl-2表达均减少,和对应组细胞比较(P均<0.01),Bax、Casepase3、Caspase9表达均增加,和对应组细胞比较(P均<0.05);照射后,相对于空白对照组、无义转染组,上调组Bcl-2表达增多(P均<0.01),Bax、Casepase3、Caspase9表达减少(P均<0.01);下调组Bcl-2表达减少(P均<0.05),Bax、Casepase3、Caspase9表达增多(P均<0.01);无义转染组、空白对照组比较,P均﹥0.05。结论:1.LncRNA SPRY4-IT1在结直肠组织癌中高表达,表现为癌基因的特性,并与肿瘤的临床病理特征有一定的相关性。2.上调SPRY4-IT1可能通过促进Bcl-2表达,抑制Bax、Caspase3、Caspsase9表达而促进结直肠癌细胞增殖、抑制其凋亡。3.SPRY4-IT1与放射敏感性有关,通过调节凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase3、Caspsase9表达,敲低SPRY4-IT1的表达联合放射治疗可显著抑制肿瘤生长。4.SPRY4-IT1可能成为结直肠癌分子靶向治疗新的治疗靶点。