论文部分内容阅读
山苍子（Listea cubeba（Lour） Pers.）是我国乃至世界香料行业的重要原料树种之一，隶属于樟科（Lauraceae）木姜子属（Litsea lam.），多为灌木或小乔木生长类型。主要分布于我国南部和东南亚各国，分布范围较广，生物多样性较丰富，但是有关山苍子的研究报道不多，特别是育种及遗传变异方面研究很少见有研究报道。探究不同地理居群山苍子的变异规律，可以为山苍子新品种选育和山苍子遗传资源保育奠定理论基础。本研究选择分布于我国长江以南7个省份的10个代表性山苍子天然居群，研究了山苍子的形态学特征变异、主要经济性状变异和遗传变异，揭示其变异水平和变异规律，得到如下主要结论：（1）山苍子的表型性状在居群间和居群内存在极其丰富的变异，各性状的多样性和分化水平较高。山苍子的10个叶片性状和种实性状在居群间和居群内均存在极显著差异，平均变异系数从大到小排序为贵州织金ZJ（17.30%）>贵州毕节BJ（15.44%）>四川长宁CN（14.47%）>浙江富阳FYZ（14.22%）>江西分宜FYJ（13.91%）>湖南永州YZ（13.027%）>江西安远AY（12.65%）>福建永安YA（12.06%）>云南景东JD（11.12%）>福建建瓯JO（11.03%）；居群表型性状分化以居群间变异为主，表型分化系数均值为60.19%；其中果实形态、叶片形态、果实重和种子重4类性状在居群间的表型分化系数（Vst）均值分别为51.27%、66.66%、54.57%和72.29%；平均变异系数（CV）分别为6.60%、16.91%、19.71%和13.40%；果实形态的表型分化系数和变异系数最小，表明其性状最为稳定；10个表型性状间多数呈显著或极显著相关，性状与产地的地理气候因子间的相关性较差；系统聚类将10个种群共分为4类，居群间的分类并没有依地理距离而聚类，表型性状的Mahalanobis距离与地理距离的相关不显著（r=0.0425, p=0.8215），进一步表明山苍子叶片和种实性状的变异在空间上是不连续性的。（2）各地理居群山苍子果实含油率与柠檬醛含量差异极显著,受经度和纬度的变异较为明显。其中精油含量最高的为景东居群（4.56%），最低的为分宜居群（3.14%）；柠檬醛含量最高的为永安居群（7.01%），最低的为毕节居群（1.85%）；居群间柠檬醛含量的变异程度要大于居群内的变异（Vst=57.87%）。各居群精油含量、柠檬醛含量与原产地地理生态因子的相关分析揭示，精油含量的变异特点表现为随经度的递增而递减，受水分和油脂积累关键期的温度变化影响较大；柠檬醛含量的变异特点表现为随经度的递增而递增，受水分的调节比较明显；系统聚类将山苍子各地理居群的种质资源类型主要划分为西南部和东南部两个类型。（3）成功摸索了适合山苍子基因组DNA提取的材料和方法，并进一步建立和优化了山苍子AFLP分子标记反应体系。结果表明，选用山苍子植株的顶芽组织，并采用改良的CTAB法进行样本DNA的提取，所得的DNA其质量能满足AFLP分子标记实验的要求；山苍子基因组DNA经5U EcoR I和5U Mse I酶切1h即可完全酶切；最佳的选择性扩增体系为20uL反应体系中含有1.0U Taq DNApolymerase、2uL10×PCR Buffer、1.8uL25mmol L-1MgCl2、1.4uL2.5mmol L-1dNTP、100ng uL-1引物各1.0uL。使用该反应体系获得了清晰、稳定的DNA指纹图谱,并筛选出10对多态性较好的AFLP引物组合。